Domov Rada

Koľko dní sa robí PCR analýza infekcií. PCR analýza. Ako sa robí STD náter?

20.12.2020

Polymerázová reťazová reakcia (PCR) je vysoko presná metóda na diagnostiku dedičných patológií, infekcií, vírusových ochorení v ktoromkoľvek štádiu (akútnych alebo chronických), ako aj - v počiatočnom štádiu - pred zjavnými prejavmi ochorenia identifikáciou patogénov na základe ich DNA, RNA , ktoré sú genetickým materiálom, vo vzorkách získaných od pacienta. A dnes si povieme niečo o podstate, diagnostických fázach a princípoch metód polymerázovej reťazovej reakcie (PCR), ako aj o ich nákladoch.

Čo je to polymerázová reťazová reakcia

Základom analýzy je amplifikácia (zdvojnásobenie) - vytvorenie mnohých kópií z krátkeho kúska DNA (deoxyribonukleová kyselina), ktorá predstavuje ľudský genetický komplex. Na výskum je potrebné veľmi malé množstvo fyziologických látok (spútum, výkaly, škrabanie epitelu, šťava z prostaty, krv, sperma, plodová voda, hlien, placentárne tkanivo, moč, sliny, pleurálna tekutina, mozgovomiechový mok). V takom prípade je napríklad možné v urogenitálnom trakte pacienta zistiť aj jediný škodlivý mikrób.

Metódu PCR (polymerázová reťazová reakcia) vyvinul americký vedec K. Mullis, ktorý v roku 1993 získal Nobelovu cenu.

Aktívne použité:

  • pri včasnej diagnostike infekcií genetické;
  • pri súdnom lekárskom vyšetrení za prítomnosti extrémne malého množstva DNA na účely výskumu;
  • vo veterinárnej medicíne, farmácii, biológii, molekulárnej genetike;
  • pre osobnú identifikáciu pomocou DNA, potvrdenie otcovstva;
  • v paleontológii, antropológii, ekológii (pri sledovaní kvality výrobkov, environmentálnych faktorov).

Toto video vám podrobne povie, čo je polymerázová reťazová reakcia:

Komu je pridelený?

Polymerázová reťazová reakcia v diagnostike infekčných chorôb je jednou z najspoľahlivejších metód osobitnej presnosti a spoľahlivosti. Napríklad spoľahlivosť PCR analýzy na chlamýdie a mnoho ďalších patogénov je takmer 100% (absolútna). Najčastejšie je postup polymerázovej reťazovej reakcie predpísaný pacientom, ktorí majú pri diagnostikovaní ťažkosti s identifikáciou konkrétneho patogénu.

Laboratórny test PCR sa používa:

  • na detekciu patogénov, ktoré spôsobujú infekciu močových a pohlavných orgánov, ktoré je ťažké identifikovať pri použití kultúr alebo imunologických metód;
  • opätovne diagnostikovať HIV v počiatočnom štádiu v prípade pozitívneho, ale pochybného výsledku primárneho testu (napríklad u novorodencov od rodičov infikovaných AIDS);
  • zaviesť onkologické ochorenie v počiatočnom štádiu (štúdia mutácií onkogénov) a individuálna korekcia liečebného režimu u konkrétneho pacienta;
  • s cieľom včasného odhalenia a možnej liečby dedičných patológií.

Budúci rodičia teda urobia analýzu, aby zistili, či sú nositeľmi genetickej patológie, u detí PCR určuje pravdepodobnosť náchylnosti na dedičné ochorenie.

  • na detekciu patológií plodu v počiatočnom období gravidity (jednotlivé bunky rastúceho embrya sa vyšetrujú na možné mutácie);
  • u pacientov pred transplantáciou orgánov - na "typizáciu tkaniva" (stanovenie kompatibility tkaniva);
  • na identifikáciu nebezpečných patogénnych organizmov v darovanej krvi;
  • u novorodencov - na detekciu skrytých infekcií;
  • posúdiť výsledky antivírusovej a antimikrobiálnej liečby.

Prečo podstúpiť taký postup

Pretože PCR je vysoko účinná diagnostická metóda, ktorá poskytuje takmer 100% výsledok, používa sa tento postup:

  • potvrdiť alebo vylúčiť konečnú diagnózu;
  • rýchle hodnotenie účinnosti terapie.

V mnohých prípadoch je PCR jediným možným testom na detekciu vyvíjajúceho sa ochorenia, ak sú iné bakteriologické, imunologické a virologické diagnostické techniky zbytočné.

  • Vírusy sa detegujú pomocou PCR ihneď po infikovaní a pred objavením sa príznakov ochorenia. Včasné zistenie vírusu umožňuje rýchle ošetrenie.
  • Takzvaná „vírusová záťaž“ (alebo - počet vírusov v tele) sa tiež stanoví kvantitatívnou analýzou DNA.
  • Špecifické patogény (napríklad Kochov bacil) sú ťažké a ich kultivácia trvá príliš dlho. PCR analýza vám umožňuje rýchlo identifikovať minimálny počet patogénov (živých aj mŕtvych) vo vzorkách vhodných na testovanie.

Používa sa podrobná analýza DNA patogénu:

  • určiť jeho citlivosť na konkrétne typy antibiotík, čo vám umožňuje okamžite začať liečbu;
  • kontrolovať šírenie epidémií medzi domácimi, divými zvieratami;
  • identifikovať a sledovať nové infekčné mikrobiálne druhy a podtypy patogénov, ktoré vyvolali predchádzajúce epidémie.

Typy diagnostiky

Štandardná metóda

Analýza polymerázovej reťazovej reakcie sa vykonáva na základe opakovanej amplifikácie (zdvojnásobenia) špecifického fragmentu DNA a RNA pomocou špeciálnych primerových enzýmov. Vďaka kopírovaciemu reťazcu sa získa dostatok materiálu na výskum.

Počas postupu sa kopíruje iba požadovaný fragment (zodpovedajúci špecifikovaným konkrétnym podmienkam) a ak je vo vzorke skutočne prítomný.

Ako funguje PCR, je popísané v tomto podrobnom videu s užitočnými schémami:

Iné metódy

  • PCR v reálnom čase... V tomto type výskumu sa proces identifikácie daného fragmentu DNA začína po každom cykle, a nie po dokončení celého reťazca počas 30 - 40 cyklov. Tento typ štúdie vám umožňuje získať informácie o množstve patogénu (vírusu alebo mikróbu) v tele, to znamená vykonať kvantitatívnu analýzu.
  • RT-PCR (režim reverznej transkripcie)... Táto analýza sa používa na nájdenie jednovláknovej RNA na detekciu vírusov, ktorých genetickým základom je RNA (napríklad vírus hepatitídy C, vírus imunodeficiencie). V takejto štúdii sa používa špeciálny enzým - reverzná transkriptáza a špecifický primer, a na základe RNA sa vytvára jednoreťazcová DNA. Potom sa z tohto vlákna izoluje druhé vlákno DNA a vykoná sa štandardný postup.

Indikácie pre

Procedúra PCR sa používa na klinike infekčných chorôb, neonatológie, pôrodníctva, pediatrie, urológie, gynekológie, venerológie, neurológie, nefrológie, oftalmológie.

Indikácie pre účel analýzy:

  • zistiť riziko vzniku genetických abnormalít u dieťaťa s pravdepodobnosťou dedičných patológií;
  • diagnóza oboch rodičov pri plánovaní tehotenstva alebo vážny stav matky počas prebiehajúceho tehotenstva;
  • ťažkosti s počatím, identifikácia príčin neplodnosti;
  • podozrenie na genitálne infekcie v akútnom štádiu as príznakmi ich prechodu na chronické;
  • detekcia príčin zápalových procesov neznámeho pôvodu;
  • nechránený náhodný a opakovaný sex;
  • stanovenie citlivosti patogénneho mikroorganizmu na konkrétne antibiotiká;
  • pacienti s podozrením na latentnú infekciu na detekciu patogénov pred rozvinutím zjavných príznakov (predklinická diagnóza);
  • pacientov na potvrdenie zotavenia z choroby (retrospektívna diagnóza);:

Diagnostika sa používa aj vtedy, keď je potrebné presne identifikovať nasledujúce patogény:

  • vírusy hepatitídy (A B C G), vírusy ľudskej imunodeficiencie, cytomegalovírus;
  • cholera vibrio;
  • vírus herpes simplex, herpetiformné druhy;
  • retro - adeno - a rinovírusy;
  • vírusy rubeoly, vírusy Epstein-Barr, ovčie kiahne (Zoster - vírus);
  • parvo - a picornovírusy;
  • baktéria Helicobacter pylori;
  • legionella, patogénne typy coli;
  • staphylococcus aureus;
  • patogén;
  • klostrídie, záškrt a haemophilus influenzae;

Používa sa tiež na identifikáciu infekcií:

  • infekčná mononukleóza;
  • borelióza, listerióza, kliešťová encefalitída;
  • kandidóza spôsobená Candida;
  • genitálne infekcie - trichomoniáza, ureaplazmóza, bledý treponém, gardnerelóza, kvapavka, mykoplazmóza, chlamýdie;
  • tuberkulóza.

Kontraindikácie pre

Pretože sa postup neuskutočňuje u pacienta, bez ovplyvnenia tela, ale s biologickým materiálom odobraným na výskum, neexistujú žiadne kontraindikácie pre PCR kvôli absencii potenciálneho nebezpečenstva.

Odber biomateriálu z cervikálneho kanála maternice sa však po procedúre kolposkopie nevykonáva. Dodávka náterov a škrabancov na analýzu je povolená iba 4 - 6 dní po ukončení menštruácie a úplnom zastavení výtoku.

Je metóda bezpečná

Nie je možný negatívny vplyv na pacienta počas izolovanej štúdie jeho biomateriálu v laboratórnych podmienkach.

Príprava na postup (dodávka biologických látok na analýzu)

Ako vzorka pre PCR analýzu, v ktorej je detegovaná DNA cudzieho patogénu, slúži akákoľvek biologická tekutina, tkanivo, sekréty tela. Odber vzoriek testovanej látky sa vykonáva vo forme odberu krvi z žily, škrabania z hrtana, nosnej dutiny, močovej trubice, pleurálnej dutiny, krčka maternice.

Pred diagnostickým postupom lekár pacientovi vysvetlí, aký materiál sa odoberie:

  1. Pri vyšetrení na infekcie pohlavných orgánov sa odoberá výtok z pohlavných orgánov, moč, náter z močovej trubice.
  2. Pri analýze na herpetické infekcie, cytomegalovírus, mononukleózu - berú moč, náter z hrdla, na hepatitídu, toxoplazmózu - krv z žily.
  3. Na diagnostiku rôznych typov sa odoberá mozgovomiechový mok.
  4. V pulmonológii sú vzorkami na analýzu spútum a pleurálna tekutina.
  5. Keď sa vykonáva štúdia možných intrauterinných infekcií pri nosení plodu, použije sa na analýzu plodová voda a bunky placenty.

Spoľahlivosť a presnosť analýzy závisí od sterility podmienok pri odbere materiálu. Pretože štúdia PCR je vysoko citlivá, akákoľvek kontaminácia testovanej látky môže výsledok skresliť.

Kompetentná príprava na dodávku biomateriálu nepredstavuje pre pacientov žiadne ťažkosti. Existujú určité odporúčania:

  • pri analýze na genitálne infekcie:
    • vylúčiť dôverné kontakty 72 hodín pred dodaním materiálu;
    • prestaňte používať akékoľvek vaginálne výrobky 3 dni vopred;
    • od večera predchádzajúceho dňa nehygienizujte študovanú oblasť;
    • pri odbere vzorky z močovej trubice vylúčte močenie počas 3 až 4 hodín;
  • prestať užívať antibiotiká mesiac pred testovaním na infekcie;
  • krv sa daruje ráno pred jedlom a pitím;
  • odber prvej rannej dávky moču sa vykonáva v sterilnej nádobe po dôkladnej intímnej toalete.

Ďalej sa dozviete, ako sa diagnostika pomocou techniky polymerázovej reťazovej reakcie vykonáva.

Aký je postup

Pri vykonávaní štúdie PCR sa určité cykly v reaktore (zosilňovač alebo tepelný cyklovač) opakujú znova a znova:

  1. Prvým krokom je denaturácia... Sliny, krv, biopsia, gynekologické vzorky, spútum, v ktorom je podozrenie na prítomnosť DNA (alebo RNA) patogénu, sa umiestnia do zosilňovača, kde sa materiál zahreje a DNA sa rozdelí na dva samostatné reťazce.
  2. Druhým krokom je žíhanie alebo mierne ochladenie materiálu a pridanie k nej priméry, ktoré sú schopné rozpoznávať a viazať sa na požadované oblasti v molekule DNA.
  3. Tretím krokom je predĺženie - nastáva po pripojení 2 primérov ku každému z reťazcov DNA. Počas procesu je dokončený fragment DNA patogénu a je vytvorená kópia.

Tieto cykly sa opakujú typu „reťazová reakcia“ a zakaždým vedú k duplikácii kópií konkrétneho kúska DNA (napríklad segmentu, kde je naprogramovaný určitý vírus). V priebehu niekoľkých hodín sa vytvorí viac kópií fragmentu DNA a ich prítomnosť sa zistí vo vzorke. Potom sa vykoná analýza a porovnanie výsledkov s údajmi z databázy rôznych typov patogénov s cieľom určiť typ infekcie.

O interpretácii výsledkov a záveroch založených na reakcii PCR si prečítajte nižšie.

Dekódovanie výsledkov

Konečný výsledok štúdie sa vydá do 1 - 2 dní po dodaní biologického materiálu. Často - už prvý deň po analýze.

Kvalitatívna analýza

  • Negatívnevýsledok znamená, že v látke predloženej na výskum sa nenašli stopy infekčných agensov.
  • Pozitívnevýsledok znamená detekciu patogénnych vírusov alebo baktérií v biologickej vzorke s veľmi vysokou mierou presnosti v čase dodania.

Ak je výsledok pozitívny, ale neexistujú žiadne známky aktivácie infekcie, tento stav tela sa nazýva asymptomatický „zdravý nosič“. Najčastejšie sa to pozoruje pri odbere biomateriálu z určitého miesta (cervikálny kanál, močová trubica, ústna dutina) s vírusovými ochoreniami. Liečba v tomto prípade nie je potrebná, je však nevyhnutný stály lekársky dohľad, pretože existuje možnosť:

  • šírenie vírusu z nosičov a infekcia zdravých ľudí;
  • aktivácia procesu a prechod choroby na chronickú formu.

Ak je však krvný test pozitívny, znamená to, že infekcia zasiahla telo, a už nejde o stav nosiča, ale o patológiu, ktorá si vyžaduje okamžitú špecifickú liečbu.

Kvantitatívna analýza

Kvantitatívny výsledok určuje špecialista špeciálne pre konkrétny typ infekcie. Na jeho základe je možné posúdiť stupeň vývoja, štádium ochorenia, čo umožňuje pohotovo predpísať správnu liečbu.

priemerná cena

Ceny za uskutočnenie polymerázovej reťazovej reakcie sú určené: typom výskumu, zložitosťou identifikácie patogénu, obtiažnosťou odberu biologického materiálu, typom analýzy (kvalitatívnej alebo kvantitatívnej) a cenovou úrovňou v laboratóriu.

Na druhej strane, pri štúdiu PCR možno pri odbere jedného druhu materiálu naraz identifikovať niekoľko patogénov naraz. To šetrí ďalšie laboratórne testy.

Približne náklady na analýzu PCR v rubľoch:

  • gonokok, gardnerella, Trichomonas vaginalis - od 180
  • chlamydia trachomatis - od 190
  • papilomavírus - od 380 do 500
  • biocenóza urogenitálneho traktu u žien (kvantitatívne a kvalitatívne hodnotenie mikroflóry) - od 800.

Ešte užitočnejšie informácie týkajúce sa výskumu PCR nájdete vo videu nižšie:

Podstata diagnostickej metódy PCR

Metóda polymerázovej reťazovej reakcie (PCR) je založená na princípoch molekulárnej biológie a patrí do oblasti genetického výskumu.

Akýkoľvek živý organizmus obsahuje vo svojej štruktúre molekuly nukleovej kyseliny - DNA a RNA. Jedná sa o druh genetického pasu, ktorý pomáha určiť, ku ktorému druhu tento alebo ten „nositeľ“ patrí. Na skenovanie tohto „pasu“ však bolo donedávna potrebné určité minimálne množstvo biologického materiálu. Ak bola koncentrácia DNA nižšia, ako sa požadovalo, diagnostická analýza nebola možná.

Pri diagnostike pomocou PCR je vzorka biologického materiálu ošetrená špeciálnymi enzýmami (polymerázy), ktoré umožňujú zahájiť proces viacnásobného kopírovania existujúcej DNA (RNA). Pomocou kaskády reťazových reakcií je podľa princípu geometrickej progresie možné za niekoľko hodín z jednej molekuly nukleovej kyseliny získať niekoľko desiatok biliónov kópií. Tento objem je viac ako dosť pre akékoľvek porovnávacie štúdie.

Na analýzu sa používa zosilňovač, v ktorom za prísneho teplotného režimu prebieha proces opakovanej replikácie DNA. Spravidla stačí 20 - 30 replikačných cyklov. Každá z nich obsahuje 3 po sebe nasledujúce fázy:

  • denaturácia - zahrievanie DNA matice na 96 ° C so zničením vodíkových väzieb medzi susednými reťazcami;
  • žíhanie - zníženie teploty o 4 ° C na vytvorenie replikačnej vidlice;
  • elongácia - spustenie DNA polymeráz pre syntézu nových nukleotidových reťazcov založených na materských.

Každý trojstupňový cyklus trvá v priemere 15-20 minút.

Výhody diagnostiky PCR

PCR analýza je vysoko technologická a vyžaduje od pracovníkov laboratória profesionalitu, pre modernú medicínu sa však stala zdrojom bezprecedentných príležitostí v oblasti presnej diagnostiky.

Výhody PCR:

  • všestrannosť (je možné preskúmať akýkoľvek biologický materiál - od krviniek, slín a vlasov až po podozrivé škvrny na mieste činu);
  • vysoký prah citlivosti (metóda je schopná poskytnúť výsledok, ak sú vo vzorke jednotlivé bunky alebo jednotlivé molekuly DNA);
  • multitasking - v jednom prístupe možno identifikovať niekoľko typov informačných nosičov naraz (bakteriologické metódy toho nie sú schopné, pretože pre každý typ mikroorganizmu vyžadujú odlišné živné médiá);
  • schopnosť vykonávať presnú kvantitatívnu analýzu;
  • rýchlosť spracovania (na rozdiel od iných druhov genetického výskumu trvá diagnostika PCR iba 5-7 hodín);
  • presnosť výsledku (pri dodržaní technológie je chyba prakticky vylúčená);
  • relatívne nízke náklady (PCR analýza nepresahuje priemernú cenu za štandardné testy).

Všetky tieto výhody umožňujú použitie polymerázovej reťazovej reakcie na pravidelné sledovanie procesu úpravy.

Vývojár metódy diagnostiky PCR získal Nobelovu cenu za „mozog“ z nejakého dôvodu. Metóda polymerázovej reťazovej reakcie umožňuje:

  • na stanovenie kmeňa infekčného agens s minimálnym obsahom v biomateriáli (až po jednotlivé vírusové štruktúry);
  • vypočítať presnú koncentráciu patogénu v celom tele (na stanovenie optimálnej dávky liekov);
  • posúdiť stupeň patologického vplyvu na pacienta a identifikovať kmene s vysokou farmakologickou rezistenciou;
  • stanoviť následné štádiá infekcie a urobiť ďalšiu prognózu.

Je to zaujímavé! Možnosti PCR analýzy sú oveľa širšie ako kvantitatívne a kvalitatívne hodnotenie infekčného pozadia v ľudskom tele. Okrem zisťovania infekcií sa používa na zistenie príbuzenstva, identifikáciu osobnosti, identifikáciu genetických patológií, porovnanie biomateriálu vo forenznej vede.

Aké infekcie je možné zistiť pomocou diagnostiky PCR

PCR analýza je schopná presne vypočítať akýkoľvek infekčný nosič zahrnutý v modernom lekárskom katalógu chorôb:

  • patogény všetkých typov hepatitídy (PCR vám umožňuje identifikovať zdroj infekcie vo fáze inkubačnej doby a zahájiť liečbu dlho predtým, ako sa objavia príznaky ochorenia);
  • patogény HIV a pohlavne prenosných chorôb (ureaplazma, mykoplazma, chlamýdie, Trichomonas);
  • skupina infekcií TORCH (relevantné pri vyšetrení tehotných žien na včasné zistenie patológií plodu);
  • tuberkulóza (latentná forma ochorenia);
  • kandidóza (latentná forma);
  • enterovírusová infekcia;
  • mononukleóza;
  • listerióza;
  • salmonelóza (definícia konkrétneho kmeňa);
  • papilomavírus;
  • gardnerelóza;
  • vírus kliešťovej encefalitídy.


Obzvlášť populárna je analýza intracelulárnych infekcií (napríklad chlamýdií), ktorých stanovenie je obvyklým spôsobom ťažké aj pri vysokej koncentrácii týchto mikroorganizmov v tkanivách pacienta.

Vzhľadom na metódu multitaskingu je možné vykonať simultánnu PCR analýzu pre 12 základných infekcií. Integrovaný prístup je pohodlnou voľbou pri bežnom skríningu tela na genitálne infekcie s minimálnym rizikom nesprávnej diagnózy.

Na poznámku! Pomocou diagnostiky PCR sa robí prognóza pre takzvané „spiace“ formy infekcií, ktoré sú v tele bez toho, aby sa prejavili príznakmi ochorenia (obzvlášť dôležité pri liečbe gynekologických a urologických ochorení, tuberkulózy, kliešťovej encefalitídy, papilomavírusu).

Aké biologické materiály sa skúmajú

Nie sú stanovené žiadne normy a hranice. Všestrannosť metódy umožňuje na analýzu použiť akýkoľvek biologický materiál:

  • škvrna z pošvy, škrabanie z močovej trubice a krčka maternice (na diagnostiku STD);
  • moč (tuberkulóza, niektoré pohlavne prenosné choroby, cytomegalovírus);
  • krv (HIV, hepatitída, infekcie TORCH);
  • výter z hrdla (mononukleóza, cytomegalovírus);
  • mozgovomiechový mok (neuroinfekcia)
  • plodová voda a placentárne tkanivo (analýza infekcií TORCH na prevenciu patológií vývoja plodu);
  • pleurálna tekutina (pľúcne infekcie).

Pre ďalšie typy diagnostiky PCR (stanovenie vzťahu, porovnanie biomateriálov) sa používajú sliny, vlasy, nechty, bunky epitelu a ďalšie zdroje genetickej informácie.

Na poznámku! Metóda diagnostiky PCR odhaľuje patogény nielen v zložení živých tkanív, ale aj vo vzorkách pôdy, vody, rastlinných substrátov; posúdiť patogénnu aktivitu mikroorganizmov v ľudskom tele aj v jeho prostredí (prítomnosť zisteného zdroja choroby umožní prijať vhodné opatrenia na jej predchádzanie v budúcnosti).

Ako sa pripraviť na test

Pacienti na našej klinike sa nemusia čudovať, kde podstúpiť test na PCR. Poskytujeme všetky podmienky pre sterilné odbery vzoriek materiálu a ich odoslanie do laboratória.

Špeciálne školenie nie je potrebné, je však vhodné postupovať podľa zoznamu všeobecných odporúčaní. Na pár dní sa vzdajte alkoholu, obmedzte fajčenie, ak je to možné, vylúčte drogy, snažte sa vyhnúť stresovým situáciám a veľkej fyzickej námahe.

Zvyšok prípravy na skúšku závisí od typu biomateriálu:

  • pred použitím náteru alebo škrabania na urogenitálne infekcie sa zdržte pohlavného styku po dobu 2 - 3 dní (ženy by sa mali ubezpečiť, že deň testu neklesne na dni menštruácie);
  • pred vykonaním krvného testu na PCR sa zdržte konzumácie ráno (test sa robí na prázdny žalúdok) a vypite pohár čistej neperlivej vody;
  • pred močením sa zdržte potravín, ktoré majú vplyv na kyslosť moču (ovocie, mäso, strukoviny, byliny).

Dôležité! Najdôležitejšou požiadavkou v PCR diagnostike infekcií je čistota biomateriálu. Snažte sa preto vyvinúť maximálne úsilie na vylúčenie kontaminácie tkanív cudzou DNA (dbajte na sterilitu prepravného obalu, osobnú hygienu a dostupnosť čistého oblečenia).

Dekódovanie PCR analýzy

Výsledky kvalitatívnej analýzy PCR pre infekcie sa vydávajú vo forme tabuľky, kde oproti každému infekčnému agens je zodpovedajúca značka:

  • negatívny výsledok (neexistuje patogén tohto typu);
  • pozitívny výsledok (zistený patogén).

Absencia príznakov ochorenia nemusí zodpovedať skutočnému obrazu, takže pre niekoho budú výsledky analýzy neočakávané. Nenechajte sa rozčúliť: identifikácia infekčného agens v počiatočných štádiách je kľúčom k úspešnej a rýchlej liečbe.

Pri uskutočňovaní kvantitatívnej analýzy PCR môžete odhadnúť stupeň vírusovej záťaže (zistite počet kópií vírusu na jednotku objemu). Vďaka tomuto typu štúdie je možné určiť intenzitu priebehu infekčného procesu, ako aj vyhodnotiť účinnosť liečby.

Analýza PCR: cena a podmienky

Priemerný diagnostický čas je 5-10 hodín. Výsledky vo forme tabuľky sú vydané nasledujúci pracovný deň po odbere biomateriálu.

Pri výbere analýzy PCR nezáleží na cene. Cena v priemere nepresahuje rozsah konvenčných biochemických testov a na rozdiel od väčšiny genetických štúdií je dostupná pre všetkých pacientov.

Polymerázová reťazová reakcia (PCR) je vysoko presná metóda molekulárnej genetickej diagnostiky, ktorá umožňuje identifikovať rôzne infekčné a dedičné choroby u ľudí, a to v akútnych aj chronických štádiách a dávno predtým, ako sa ochorenie môže prejaviť.

Polymerázovú reťazovú reakciu (PCR) vyvinul v roku 1983 Carey Mullis (USA), za čo mu bola v roku 1993 udelená Nobelova cena za chémiu.

PCR analýza sa stala akousi „zlatou normou“ pre väčšinu infekcií. Väčšina odborníkov sa s ním stretáva takmer každý deň a nevie si bez neho predstaviť konečnú diagnózu. PCR sa často stáva jedinou reakciou na detekciu aktívnych štádií ochorenia v tých okamihoch, keď iné bakteriologické, virologické a imunologické diagnostické metódy nefungujú.

Výhody diagnostiky PCR v modernej medicíne:

Priama detekcia prítomnosti patogénu (konkrétne konkrétnej oblasti DNA alebo RNA patogénu) vo vzorke, ktorá sa má študovať.
Vysoká špecifickosť vám umožňuje určiť jedinečný kúsok DNA alebo RNA, charakteristický pre konkrétny patogén, čo vylučuje možnosť falošných reakcií.
Vysoká citlivosť metódy PCR umožňuje detekovať aj jednotlivé bunky patogénov (vírusy, baktérie). Citlivosť PCR analýzy je 10 - 1 000 buniek v testovanej vzorke (napríklad citlivosť imunologických a mikroskopických testov je iba 103 - 105 buniek).
Vývoj univerzálnej techniky PCR na detekciu rôznych patogénov. Predmetom výskumu metódou PCR je genetický materiál (DNA, RNA) patogénu. Táto technika umožňuje identifikovať niekoľko patogénov z jednej biologickej vzorky.
Docela rýchle získanie výsledku analýzy. Kompletná štúdia sa uskutoční za 4 - 4,5 hodiny, menej často o niečo dlhšie.
Možnosť detekcie patogénov pred objavením sa príznakov ochorenia (predklinická diagnóza) a po prekonanom ochorení (retrospektívna diagnóza). Príkladom predklinickej diagnostiky bude vyšetrenie počas inkubačnej doby (od okamihu infekcie až do nástupu sťažností pacienta), ako aj latentná infekcia (keď nie sú vôbec žiadne príznaky, ale existujú iba laboratórne údaje - napríklad PCR). Jedným z dôležitých bodov diagnostiky PCR je vykonávanie PCR v archívnom materiáli alebo biologických pozostatkoch, čo je dôležité pre identifikáciu osoby alebo otcovstva.

V súčasnosti PCR diagnostika prechádza významným vývojom. Samotná metóda sa zdokonaľuje, objavujú sa stále nové odrody PCR, na trh s liečivami vstupujú nové testovacie systémy pre túto reakciu. Vďaka tomu sa náklady na štúdie PCR každý rok stávajú dostupnejšie pre širokú škálu pacientov.

Na čom je založená metóda PCR?

Základom polymerázovej reťazovej reakcie je viacnásobné zdvojnásobenie (amplifikácia) určitej oblasti DNA alebo RNA pomocou laboratórnych enzýmov. Vo výsledku sa vytvorí množstvo DNA alebo RNA dostatočné na vizuálnu analýzu. V priebehu štúdie sa kopíruje iba tá časť, ktorá vyhovuje stanoveným podmienkam, a to iba za situácie jej prítomnosti v testovacej vzorke.

Napríklad materiál na výskum, v ktorom sa predpokladá prítomnosť fragmentov DNA alebo RNA patogénu (sliny, krv, moč, sekréty z genitálií), sa umiestni do špeciálneho reaktora (zosilňovača). Ďalej sa k nej pridávajú špecifické enzýmy, ktoré sa viažu na DNA alebo RNA patogénu, a syntetizuje sa ich kópia. Toto kopírovanie prebieha v niekoľkých fázach podľa typu „reťazovej reakcie“ a z jednej kópie genetického materiálu môžu nakoniec vzniknúť stovky a tisíce kópií. Potom nasleduje analýza a porovnanie výsledku s dostupnou databázou o štruktúre rôznych patogénov. Pomocou PCR je možné nielen identifikovať typ patogénu, ale aj poskytnúť kvantitatívny výsledok analýzy, to znamená počet patogénov v ľudskom tele.

Metóda PCR v súčasnosti rozširuje škálu výskumných možností: zavádzanie mutácií, spájanie fragmentov DNA a v medicíne sa rozšírila napríklad pri zisťovaní otcovstva, vzniku nových génov atď.

Aké infekcie je možné zistiť pomocou diagnostiky PCR

1) HIV infekcia (dá sa zistiť vírus ľudskej imunodeficiencie HIV-1)
2) Vírusová hepatitída A, B, C, G (RNA-HAV, DNA-HBV, RNA-HCV, RNA-HGV)
3) Infekčná mononukleóza (DNA vírusu Epstein-Barr-EBV)
4) Cytomegalovírusová infekcia (DNA-CMV)
5) Herpetická infekcia (DNA - vírus herpes simplex HSV typu 1 a 2)
6) STI (sexuálne prenosné infekcie) - ureaplazmóza, gardnerelóza, chlamýdie, mykoplazmóza, trichomoniáza,
7) Tuberkulóza (Mycobacterium tuberculosis)
8) Onkogénne vírusy - infekcia papilomavírusom (ľudský papilomavírus (vrátane jeho onkogénnych typov 16, 18, 31, 33, 45, 51, 52, 56, 58 a 59)
9) Borelióza, kliešťová encefalitída
10) Listerióza
11) Kandidóza (huby rodu Candida)
12) Infekcia Helicobacter pylori
iné

Vzhľadom na rozsah patogénov sa diagnostika PCR aktívne využíva v gynekologickej, urologickej praxi, v praxi infekčných chorôb, v pulmonológii, ftizeológii, gastroenterológii, hematológii, onkológii a ďalších.

Materiál pre výskum a pravidlá jeho zhromažďovania

Materiálom pre štúdie PCR, v ktorom je možné identifikovať cudziu DNA baktérií alebo DNA alebo RNA vírusu, môžu byť rôzne biologické médiá a ľudské tekutiny: hlien, moč, krv, spútum, škrabanie buniek epitelu, tkanivá placenty, krv, džús prostaty, plodová voda, pleurálna tekutina.

Pri skríningu na pohlavne prenosné infekcie (STI) sa mužom a ženám odoberá moč, výtery z pošvy alebo škrabanie z krčka maternice, škvrna alebo škrabanie z močovej trubice.

Pri testovaní na infekcie (herpetické infekcie, CMVI, mononukleóza, toxoplazmóza, hepatitída B, C, infekcia HIV) sa odoberie krv na PCR.

Na diagnostiku infekčnej mononukleózy, CMVI, herpetickej infekcie sa odoberie tampón z hrdla, na vyšetrenie na CMVI - moč. Často sa na vyšetrenie poškodenia nervového systému v mnohých štúdiách odoberá mozgovomiechový mok.

V pulmonológii je to materiál spúta, pleurálna tekutina.

Pri vyšetrení na vnútromaternicové infekcie - plodová voda, placentárne tkanivo.

Príprava na dodávku materiálu a diagnostiku PCR

Takmer všetci pacienti, ktorí podstúpia diagnostiku PCR, majú právo rátať so spoľahlivým, presným a rýchlym výsledkom, ktorý závisí vo veľkej miere od schopností laboratória a profesionality laboratórneho asistenta. Mnohí si zároveň nemyslia, že práve táto spoľahlivosť závisí vo veľkej miere od nás samých, a to od odporúčaní ošetrujúceho lekára, životného štýlu a správnosti odberu vzoriek materiálu. Pri odbere vzorky materiálu sa vyžadujú podmienky, ktoré vylučujú kontamináciu (kontamináciu) materiálu, a tým spochybňujú objektivitu analýzy.

Správna príprava na dodávku materiálu nie je nijako zvlášť náročná. Pre pacientov existujú nasledujúce odporúčania lekárov:

1) nežiť sexuálne deň pred dodaním materiálu;
2) krv na výskum sa podáva ráno na lačný žalúdok (nejedzte, nepite);
3) pri podávaní moču sa prvá ranná dávka odoberie do čistej sterilnej nádoby.

Podmienky pripravenosti na analýzu PCR

Konečný výsledok je hotový za 1,5 - 2 dni po dodaní materiálu. V niektorých prípadoch je výsledok pripravený prvý deň.

Dekódovanie výsledkov PCR

Negatívne výsledok PCR naznačuje, že v čase dodania neboli v testovanom materiáli nájdené žiadne stopy infekčných agensov. Väčšina prípadov ukazuje neprítomnosť infekcie, ktorú sa pokúsila zistiť v testovanej vzorke.

Pozitívne výsledok PCR naznačuje detekciu stôp infekcie v študovanej biologickej vzorke. Pozitívny výsledok s veľkou presnosťou naznačuje prítomnosť infekcie v danom čase.

Existujú situácie, keď je PCR pozitívna, ale o aktívnej infekcii sa nedá hovoriť - ide o takzvaného „zdravého nosiča“ bez klinických príznakov ochorenia, ktorý si nevyžaduje liečbu, ale vyžaduje dynamické pozorovanie lekára. Pozoruje sa častejšie pri mnohých vírusových infekciách (HPV, CMVI, EBV, herpetická infekcia a iné) v materiáloch, ako sú sliny, škrabanie krčka maternice, močová trubica, to znamená miestne zameranie. Nesmieme však zabúdať, že je možný prenos infekcie z nosičov na zdravých ľudí, rovnako ako je možný prechod na chronickú formu ochorenia s aktiváciou procesu. Ak je PCR pozitívna v krvi, potom už nie je nosičom a vyžaduje si špecifickú liečbu.

Kvantitatívny výsledok PCR posudzuje lekár osobitne pre konkrétnu infekciu osobitne a nemá všeobecné stupne. Na základe kvantitatívneho výsledku PCR môže lekár určiť stupeň infekčnej aktivity a nastaviť štádium ochorenia, ktoré určite ovplyvní priebeh a dávky predpísaných liekov.

Jedna z posledných znepokojujúcich otázok: aká presná je diagnostika PCR?

Pre analýzu PCR existujú 3 definície:

1. Presnosť (s vysokou pravdepodobnosťou je možná detekcia alebo absencia infekcie).
2. Špecifickosť (presnosť detekcie konkrétnej infekcie).
3. Citlivosť (aj pri nízkom obsahu genetického materiálu patogénov v testovanej vzorke bude zistená infekcia).

Polymerázová reťazová reakcia prakticky neposkytuje falošne pozitívne výsledky (to znamená, že neexistujú žiadne pozitívne vzorky bez infekcie). Falošné negatívne výsledky sú zriedkavé (častejšie je to z dôvodu absencie aktívnej infekcie u človeka v súčasnosti). Napríklad latentná infekcia, chronická infekcia bez aktivity.

Lekárka pre infekčné choroby N.I.Bykova

Video o tom, prečo a ako vykonať test na prítomnosť infekcií PCR

Mnoho ľudí nevie o PCR analýze, hoci dnes patrí medzi inovatívne metódy diagnostiky infekčných chorôb, za ktoré jej vývojár v roku 1993 dostal Nobelovu cenu. Táto high-tech metóda umožňuje odhaliť vážne choroby v ranom štádiu a pohotovo zahájiť ich liečbu.

Analýza je založená na princípoch molekulárnej biológie. Výskum metódou PCR spočíva v použití špeciálneho enzýmu, ktorý pod vplyvom teplotných podmienok kopíruje RNA a DNA baktérií a vírusov prítomných v zhromaždenom biomateriáli. Takáto hromadná reprodukcia umožňuje lekárovi presne určiť, k akému druhu baktérie, ktorá vyvolala chorobu, patrí, a tiež zmerať úroveň jej koncentrácie v biomateriáli. Postup kopírovania sa vykonáva v špeciálnom prístroji - zosilňovači, ktorý ohrieva a ochladzuje skúmavky so zozbieraným materiálom a vytvára tak vhodné podmienky na replikáciu.

Výskum PCR sa vykonáva z mnohých dôvodov, ale najčastejšie sa používa na zistenie prítomnosti takých infekčných chorôb, ako sú:

  • opar;
  • genitálne infekcie - chlamýdie, ureaplazmóza, gardnerelóza, trichomoniáza;
  • kandidóza;
  • hepatitída;
  • mononukleóza;
  • listerióza;
  • cytomegalovírus;
  • tuberkulóza;
  • ľudský papilomavírus;
  • kliešťovej encefalitíde.

PCR analýza sa neobmedzuje iba na rozsah uplatnenia v medicíne, skríning sa robí často, ak je potrebné pochopiť, kto vlastní biologický materiál nájdený na mieste činu, to znamená, že PCR analýza sa masívne využíva vo forenznej vede. Je potrebné poznamenať, že ak sa vyžaduje otcovstvo, odoberie sa ster alebo krv na PCR. Výsledky diagnostiky PCR nie sú nijako nižšie ako obvyklá analýza príbuznosti DNA a sú oveľa lacnejšie.

Diagnostické vlastnosti

PCR analýza má obrovské množstvo výhod. Najskôr je dôležité uvedomiť si citlivosť testu. Analyzátor PCR je schopný určiť molekuly DNA baktérií aj pri ich malom počte, to znamená, že lekár dostane informácie o počiatočnom štádiu ochorenia alebo začiatku chronickej formy ochorenia. Krvný test pomocou PCR je dokonca schopný určiť prítomnosť infekčného ochorenia, ktoré je v latentnej forme a nedáva sa preč.

Je potrebné poznamenať, že PCR analýzu u mužov a žien je možné vykonať v prítomnosti akéhokoľvek druhu materiálu, nemusí to byť krv alebo škvrny, vhodné sú sliny, kožné bunky a dokonca aj moč.

Výsledky analýz PCR môžu byť rozsiahle, pretože diagnostika infekcií pomocou PCR dokáže odtrhnúť niekoľko patogénov naraz, ktoré sú v jednej vzorke biomateriálu. Vyšetrenie je možné vykonať v ľubovoľnom vhodnom čase, čo ukazuje, že osoba dokáže analýzu rozpoznať v krátkom časovom období, pretože výsledky diagnostiky biomateriálu sú hotové za 5 hodín.

Všetci lekári sa zhodujú, že krvný test na PCR alebo iný materiál nikdy neposkytuje nesprávne výsledky, ak sa správne dodržiava diagnostická technika. PCR pozitívna alebo PCR negatívna môže byť falošná iba za podmienok, že pracovníci laboratória nie sú na vysokej profesionalite. Ak bol zaistený biomateriál kontaminovaný alebo nesprávne skladovaný, potom môže mať dekódovanie PCR analýzy skreslené výsledky.

Príprava na diagnostiku

Náter na PCR u žien z krčka maternice sa odoberie, ak sa vyžaduje na stanovenie pohlavne prenosných chorôb, napríklad chlamýdií, ureaplazmy alebo herpesu. Ak sa vyžaduje vykonanie PCR na týchto baktériách u človeka, potom sa od neho odoberá výtok z močovej trubice - inými slovami, šťava z prostaty. Krv sa vyšetruje pomocou PCR, ak chcú zistiť hepatitídu, toxoplazmózu a HIV. PCR analýza sa robí na mononukleózu a cytomegalovírus odstránením náteru z hrdla. Polymerázová reťazová reakcia na prítomnosť pľúcnych infekcií sa uskutočňuje za prítomnosti biomateriálu, ako je spút alebo pleurálna tekutina.

PCR počas tehotenstva sa vykonáva, ak existuje podozrenie na vnútromaternicové infekcie, ako aj na choroby a patológie nervového systému plodu. Ako biomateriál pre výskum sa tkanivo placenty odoberá z tehotného tkaniva. Ak má osoba léziu nervového systému, preskúmajte mozgovomiechový mok. Na stanovenie baktérie, ako je Helicobacter pylori, sa používajú biopsie žalúdka a dvanástnika.

Často sa používa aj analýza moču, ale je to menej výhodné ako vyšetrenie krvi. Umožňuje vám zistiť prítomnosť patogénnych mikroorganizmov, ktoré vyvolávajú infekčné choroby, ale nemôžu uviesť ich presný počet a stupeň vývoja ochorenia. PCR moču sa používa, ak z nejakého dôvodu nie je možné odobrať krv alebo urobiť škvrnu. Je tiež potrebné poznamenať, že na vyšetrenie infekcií u malých detí je možné vykonať PCR v moči. Rozbor moču môže tiež určiť prítomnosť infekcie a zápalu v močovom mechúre, určiť kamene, piesok, ako aj cystitídu a uretritídu.

Ako už bolo spomenuté vyššie, môžete absolvovať test PCR, ak máte akýkoľvek biomateriál. PCR analýza, čo to je, viete, musíte tiež poznať prípravu na diagnostiku. Príprava priamo závisí od toho, čo sa má odstrániť, napríklad musíte ráno po dôkladnej hygiene genitálií darovať moč. Krv sa daruje nalačno, pri pôrode, respektíve deň vopred, je potrebné prestať s užívaním akýchkoľvek liekov. Ak existujú chronické ochorenia, potom zoznam schválených liekov na použitie rozhodne individuálne ošetrujúci lekár.

Rozbor stolice sa robí ráno po starostlivej príprave. V predvečer odovzdania je potrebné opustiť ťažké jedlo a vykonať dôkladnú hygienu genitálií. Analýza výkalov bude nespoľahlivá, ak bol biomateriál odstránený pomocou klystíru, takže je nevyhnutný prirodzený pôvod materiálu. Príprava na dodávku slín sa nevyžaduje, stačí byť od fajčenia, piť citrusovú šťavu.

Pred predložením biomateriálu na stanovenie chorôb, ktoré sa prenášajú počas sexu, musia pacienti vylúčiť pohlavný styk dva dni pred diagnostikou pomocou PCR. Počas kritických dní, dva dni po menštruácii, je ženám zakázané robiť si z krčka maternice náter. V opačnom prípade bude mať dešifrovanie PCR skreslené informácie.

Výsledky skríningu

Výhradne kvalifikovaný lekár môže podrobne vysvetliť, čo takáto analýza PCR hovorí o stave konkrétneho pacienta, nebude ľahké nezávisle porozumieť údajom uvedeným vo formulári. Ak požiadate lekára o dešifrovanie údajov, v prvom rade povie, či je výsledok pozitívny alebo negatívny. Ak je analýza negatívna, potom je osoba zdravá a v testovacom materiáli sa nenašli žiadne baktérie. V prípade pozitívneho výsledku je uvedený presný typ patogénu a jeho množstvo, môžete zistiť aj presné obdobie, kedy došlo k infekcii prítomnosťou určitých imunoglobulínov.

Existuje niekoľko tried imunoglobulínov, ktoré môžu jasne odrážať stav pacienta:

  1. IgG sa vyvíjajú v krvi po 4 týždňoch infekcie a môžu v krvi pretrvávať až niekoľko rokov. Nie vždy sú indikátorom baktérií, niekedy vystupujú ako spomienka na telo, ktoré kedysi čelilo podobnému typu patogénu.
  2. IgM - objavujú sa na samom začiatku po infekcii. Spravidla sú viditeľné už 5. deň, jedná sa o prvých obrancov tela, ktorí napadnú baktériu. Z výsledku krvi zmiznú po dvoch týždňoch. Ak sú prítomné v krvnom teste, možno predpokladať, že k infekcii došlo veľmi nedávno, asi pred týždňom.
  3. IgA signalizuje akútny vývoj bakteriálnej infekcie v tele alebo opakujúce sa štádium chronického ochorenia.

Existuje niekoľko prípadov, keď analýza ukáže pozitívny výsledok, ale človek sa vôbec necíti zle. To vôbec neznamená chybu v diagnostike, skôr ide o chronickú formu ochorenia, ktorá je v pokojovom stave, alebo sa vývoj choroby ešte len začína. V súčasnosti nie je dostatok baktérií, ktoré by mohli vyvolať príznaky.

Teraz poznáte princíp analýzy a môžete požiadať o túto diagnózu, ak existuje najmenšie podozrenie na infekčné ochorenie. Trvanie ďalšej liečby a jej účinnosť priamo závisí od toho, ako rýchlo stanovíte diagnózu, ktorá je prakticky bezbolestná. Aby ste si neustále udržali zdravie na dobrej úrovni, odporúča sa raz ročne podstúpiť preventívnu diagnostiku PCR pre pohlavné choroby, ako aj infekcie iných orgánov. Je lepšie chorobe predchádzať, ako sa neskôr vysporiadať s jej následkami.