Domov Poraďte

Koľko dní trvá test PCR na infekciu? PCR analýza. Ako urobiť náter na pohlavne prenosné choroby

20.12.2020

Polymerázová reťazová reakcia (PCR) je vysoko presná metóda v oblasti diagnostiky dedičných patológií, infekcií, vírusových ochorení v akomkoľvek štádiu (akútnom alebo chronickom), ako aj - v počiatočnom štádiu - pred zjavnými prejavmi ochorenia identifikáciou patogény na základe ich DNA, RNA, ktoré sú genetickým materiálom, vo vzorkách získaných od pacienta. A dnes budeme hovoriť o podstate, diagnostických štádiách a princípoch metód polymerázovej reťazovej reakcie (PCR), ako aj o jej nákladoch.

Čo je polymerázová reťazová reakcia

Základom analýzy je amplifikácia (zdvojenie) - vytvorenie mnohých kópií z krátkeho úseku DNA (kyselina deoxyribonukleová), ktorá predstavuje ľudský genetický komplex. Štúdia vyžaduje veľmi malé množstvo fyziologickej látky (spútum, výkaly, epiteliálne škrabance, šťava z prostaty, krv, spermie, plodová voda, hlien, placentárne tkanivo, moč, sliny, pleurálna tekutina, cerebrospinálny mok). V tomto prípade môže byť napríklad v genitourinárnom trakte pacienta detekovaný aj jeden škodlivý mikrób.

Techniku ​​PCR (polymerázová reťazová reakcia) vyvinul americký vedec K. Mullis, ktorý v roku 1993 dostal Nobelovu cenu.

Aktívne používané:

  • pri včasnej diagnostike infekcií, genetických;
  • pri súdnom lekárskom vyšetrení, keď je k dispozícii extrémne malé množstvo DNA na vyšetrenie;
  • vo veterinárnej medicíne, farmácii, biológii, molekulárnej genetike;
  • na identifikáciu osoby podľa DNA, potvrdenie otcovstva;
  • v paleontológii, antropológii, ekológii (pri sledovaní kvality produktov, environmentálnych faktorov).

Toto video vám podrobne povie, čo je polymerázová reťazová reakcia:

Komu je predpísaný?

Polymerázová reťazová reakcia v diagnostike infekčných chorôb je jednou z najspoľahlivejších metód mimoriadnej presnosti a spoľahlivosti. Napríklad spoľahlivosť analýzy PCR na chlamýdie a mnoho ďalších patogénov je takmer 100 % (absolútna). Najčastejšie je postup polymerázovej reťazovej reakcie predpísaný pacientom, ktorí majú počas diagnózy ťažkosti s identifikáciou konkrétneho patogénu.

Používa sa laboratórny test PCR:

  • na detekciu patogénov, ktoré spôsobujú infekcie močových a pohlavných orgánov, ktoré je ťažké identifikovať pomocou kultivačných alebo imunologických metód;
  • na opätovnú diagnostiku HIV v počiatočnom štádiu v prípade pozitívneho, ale sporného výsledku počiatočného testu (napríklad u novorodencov od rodičov infikovaných AIDS);
  • vytvoriť rakovina v počiatočnom štádiu (štúdia mutácií onkogénov) a individuálna korekcia liečebného režimu pre konkrétneho pacienta;
  • na účely včasnej detekcie a potenciálnej liečby dedičných patológií.

Budúci rodičia teda absolvujú test, aby zistili, či sú nositeľmi genetickej patológie, u detí PCR určuje pravdepodobnosť vystavenia chorobe prenášanej dedičnosťou.

  • na zistenie patológií plodu skoro gestácia (jednotlivé bunky rastúceho embrya sa vyšetrujú na možné mutácie);
  • u pacientov pred transplantáciou orgánov - na „typizáciu tkaniva“ (určenie kompatibility tkaniva);
  • identifikovať nebezpečné patogénne organizmy v krvi darcu;
  • u novorodencov - identifikovať skryté infekcie;
  • na vyhodnotenie výsledkov antivírusovej a antimikrobiálnej liečby.

Prečo podstúpiť takýto zákrok?

Keďže PCR je vysoko účinná diagnostická metóda, ktorá poskytuje takmer 100% výsledky, používa sa postup:

  • potvrdiť alebo vylúčiť konečnú diagnózu;
  • rýchle posúdenie účinnosti terapie.

V mnohých prípadoch je PCR jediným možným testom na zistenie rozvíjajúceho sa ochorenia, ak sú iné bakteriologické, imunologické a virologické diagnostické metódy zbytočné.

  • Vírusy sa detegujú pomocou postupu PCR bezprostredne po infekcii a pred objavením sa príznakov ochorenia. Včasná detekcia vírusu umožňuje rýchlu liečbu.
  • Takzvaná „vírusová záťaž“ (alebo počet vírusov v tele) sa tiež určuje analýzou DNA pomocou kvantitatívnej metódy.
  • Špecifické patogény (napr. Kochov bacil tuberkulózy) sú náročné a kultivácia trvá príliš dlho. Testovanie PCR umožňuje rýchlu detekciu minimálneho množstva patogénov (živých a mŕtvych) vo vzorkách vhodných na testovanie.

Používa sa podrobná analýza DNA patogénu:

  • určiť jeho citlivosť na špecifické typy antibiotík, čo umožňuje okamžitú liečbu;
  • kontrolovať šírenie epidémií medzi domácimi a voľne žijúcimi zvieratami;
  • identifikovať a sledovať nové odlišné typy mikróby a podtypy patogénov, ktoré spôsobili predchádzajúce epidémie.

Typy diagnostiky

Štandardná metóda

Analýza polymerázovej reťazovej reakcie sa uskutočňuje na základe viacnásobnej amplifikácie (zdvojenia) špecifického fragmentu DNA a RNA pomocou špeciálnych primerových enzýmov. V dôsledku kopírovacieho reťazca sa získa dostatočné množstvo materiálu na výskum.

Počas postupu sa skopíruje iba požadovaný fragment (zodpovedajúci špecifikovaným špecifickým podmienkam) a ak je skutočne prítomný vo vzorke.

Toto podrobné video s užitočnými schémami vysvetľuje, ako funguje PCR:

Iné metódy

  • PCR v reálnom čase. Pri tomto type výskumu sa proces identifikácie daného fragmentu DNA začína po každom cykle, a nie po dokončení celého reťazca 30 - 40 cyklov. Tento typ výskumu vám umožňuje získať informácie o množstve patogénu (vírusu alebo mikróbu) v tele, to znamená vykonať kvantitatívnu analýzu.
  • RT-PCR (reverzný transkripčný režim). Tento test sa používa na hľadanie jednovláknovej RNA na detekciu vírusov, ktorých genetickým základom je RNA (napríklad vírus hepatitídy C, vírus imunodeficiencie). V tejto štúdii sa používa špeciálny enzým - reverzná transkriptáza a špecifický primér a jednovláknová DNA je postavená na báze RNA. Potom sa z tohto vlákna získa druhý reťazec DNA a vykoná sa štandardný postup.

Indikácie na testovanie

Postup PCR sa používa na klinike infekčných chorôb, neonatológie, pôrodníctva, pediatrie, urológie, gynekológie, venerológie, neurológie, nefrológie a oftalmológie.

Indikácie na testovanie:

  • určenie rizika vzniku genetických abnormalít u dieťaťa s pravdepodobnosťou dedičných patológií;
  • diagnostikovanie oboch rodičov pri plánovaní tehotenstva alebo závažného stavu matky počas prebiehajúceho tehotenstva;
  • ťažkosti s počatím, identifikácia príčin neplodnosti;
  • podozrenie na sexuálne prenosné infekcie v akútnom štádiu a s príznakmi ich prechodu na chronické;
  • detekcia príčin zápalových procesov neznámeho pôvodu;
  • nechránené náhodné a pravidelné sexuálne kontakty;
  • stanovenie citlivosti patogénneho mikroorganizmu na špecifické antibiotiká;
  • pacienti s podozrením na latentnú infekciu na detekciu patogénov pred rozvojom zjavných symptómov (predklinická diagnóza);
  • pacientov na potvrdenie zotavenia po chorobe (retrospektívna diagnóza);:

Diagnostika sa používa aj vtedy, ak je potrebné presne identifikovať tieto patogény:

  • vírusy hepatitídy (A B C G), ľudská imunodeficiencia, cytomegalovírus;
  • Vibrio cholerae;
  • vírus herpes simplex, herpetiformné druhy;
  • retro - adeno - a rinovírusy;
  • vírusy rubeoly, Epstein-Barrovej, ovčích kiahní (Zoster);
  • parvo a pikornovírusy;
  • baktéria Helicobacter pylori;
  • Legionella, patogénne typy Escherichia coli;
  • Staphylococcus aureus;
  • patogén;
  • klostrídia, záškrt a hemophilus influenzae;

Používa sa tiež na určenie infekcií:

  • Infekčná mononukleóza;
  • borelióza, listerióza, kliešťová encefalitída;
  • kandidóza spôsobená hubami Candida;
  • pohlavne prenosné infekcie – trichomoniáza, ureaplazmóza, treponema pallidum, gardnerelóza, kvapavka, mykoplazmóza, chlamýdie;
  • tuberkulóza.

Kontraindikácie pre

Keďže postup sa nevykonáva s pacientom bez akéhokoľvek vplyvu na telo, ale s biologickým materiálom odobratým na výskum, neexistujú žiadne kontraindikácie pre PCR kvôli absencii potenciálneho nebezpečenstva.

Po kolposkopickom zákroku sa však z cervikálneho kanála maternice neodoberá biomateriál. Predloženie náterov a škrabancov na analýzu je povolené len 4–6 dní po skončení menštruácie a úplnom zastavení výtoku.

Je metóda bezpečná?

Žiadny negatívny vplyv na pacienta počas izolovanej štúdie jeho biomateriálu v laboratóriu nie je možný.

Príprava na postup (predloženie biologických látok na analýzu)

Akákoľvek biologická tekutina, tkanivo alebo telesné sekréty slúžia ako vzorka pre analýzu PCR, ktorá deteguje DNA cudzieho patogénu. Testovaná látka sa odoberá vo forme odberu krvi zo žily, zoškrabu z hrtana, nosovej dutiny, močovej trubice, pleurálnej dutiny, krčka maternice.

Pred diagnostickým postupom lekár vysvetlí pacientovi, aký materiál sa bude zbierať:

  1. Pri vyšetrovaní pohlavne prenosných infekcií sa odoberá sekrét z pohlavných orgánov, moč a ster z močovej trubice.
  2. Pri analýze herpetických infekcií sa na analýzu odoberá cytomegalovírus, mononukleóza, moč a výter z hrdla, pri hepatitíde, toxoplazmóze sa odoberá krv zo žily.
  3. Na diagnostické účely rôzne druhy Odoberá sa cerebrospinálny mok.
  4. V pulmonológii sú vzorky na analýzu spútum a pleurálna tekutina.
  5. Pri vykonávaní štúdie o možných vnútromaternicových infekciách počas tehotenstva sa na analýzu používa plodová voda a placentárne bunky.

Spoľahlivosť a presnosť analýzy závisí od sterility podmienok pri odbere materiálu. Keďže testovanie PCR je vysoko citlivé, akákoľvek kontaminácia testovanej látky môže skresliť výsledok.

Kompetentná príprava na dodávku biomateriálu nepredstavuje pre pacientov žiadne ťažkosti. Existujú určité odporúčania:

  • pri analýze pohlavne prenosných infekcií:
    • vylúčiť intímne kontakty 72 hodín pred odoslaním materiálu;
    • prestaňte používať akékoľvek vaginálne produkty 3 dni predtým;
    • od večera predchádzajúceho dňa nevykonávajte hygienu vyšetrovanej oblasti;
    • vylúčiť močenie 3–4 hodiny pred odberom vzorky z močovej trubice;
  • prestať užívať antibiotiká mesiac pred testovaním na infekcie;
  • krv sa daruje ráno pred jedlom a pitím;
  • Prvá ranná vzorka moču sa odoberie do sterilnej nádoby po dôkladnej intímnej toalete.

Prečítajte si nižšie o tom, ako sa vykonáva diagnostika pomocou metódy polymerázovej reťazovej reakcie.

Ako postup funguje?

Pri vykonávaní štúdie PCR sa určité cykly opakujú znova a znova v reaktore (zosilňovač alebo tepelný cyklovač):

  1. Prvým krokom je denaturácia. Sliny, krv, bioptický materiál, gynekologické vzorky, spútum, v ktorých je podozrenie na prítomnosť DNA (alebo RNA) patogénu, sa umiestnia do zosilňovača, kde sa materiál zahreje a DNA sa rozštiepi na dva samostatné reťazce.
  2. Druhým krokom je žíhanie alebo mierne ochladenie materiálu a pridanie primerov, ktoré dokážu rozpoznať požadované oblasti v molekule DNA a naviazať sa na ne.
  3. Tretím krokom je predĺženie– nastáva po pripojení 2 primérov ku každému z reťazcov DNA. Počas procesu sa dokončí fragment DNA patogénu a vytvorí sa jeho kópia.

Tieto cykly sa opakujú ako „reťazová reakcia“, pričom zakaždým vedú k zdvojnásobeniu kópií špecifického fragmentu DNA (napríklad segmentu, v ktorom je naprogramovaný špecifický vírus). V priebehu niekoľkých hodín sa vytvorí veľa kópií fragmentu DNA a zistí sa ich prítomnosť vo vzorke. Potom sa výsledky analyzujú a porovnajú s údajmi z databázy rôznych typov patogénov, aby sa určil typ infekcie.

Prečítajte si nižšie o dekódovaní výsledkov a záveroch na základe reakcie PCR.

Dekódovanie výsledkov

Konečný výsledok štúdie je vydaný 1 – 2 dni po odovzdaní biologického materiálu. Často - už v prvý deň po analýze.

Kvalitatívna analýza

  • Negatívne výsledok znamená, že v látke predloženej na testovanie sa nenašli žiadne stopy infekčných agens.
  • Pozitívny výsledkom sa rozumie zistenie patogénnych vírusov alebo baktérií v biologickej vzorke s veľmi vysokou presnosťou v čase odovzdania materiálu.

Ak je výsledok pozitívny, ale nezistia sa žiadne známky zvýšenej infekcie, tento stav tela sa nazýva asymptomatický „zdravý prenos“. Najčastejšie pozorované pri odbere biomateriálu z určitého miesta (cervikálny kanál, močová trubica, ústna dutina) pri vírusových ochoreniach. V tomto prípade nie je potrebná liečba, ale je potrebný stály lekársky dohľad, pretože existuje možnosť:

  • šírenie vírusu z nosičov a infekcie zdravých ľudí;
  • aktivácia procesu a prechod choroby na chronickú formu.

Ak je však krvný test pozitívny, znamená to, že infekcia zasiahla telo, a to už nie je stav nosiča, ale patológia, ktorá si vyžaduje okamžitú špecifickú terapiu.

Kvantitatívna analýza

Kvantitatívny výsledok určuje špecialista špeciálne pre konkrétny typ infekcie. Na jeho základe je možné posúdiť stupeň vývoja a štádium ochorenia, čo umožňuje promptne predpísať správnu liečbu.

priemerná cena

Ceny za polymerázovú reťazovú reakciu sa určujú podľa: typu výskumu, náročnosti identifikácie patogénu, náročnosti odberu biologického materiálu, typu analýzy (kvalitatívnej alebo kvantitatívnej) a cenovej úrovne v laboratóriu.

Na druhej strane, pri štúdiu PCR je možné pri zbere jedného typu materiálu na analýzu identifikovať niekoľko patogénov naraz. To vám umožní ušetriť na iných laboratórnych testoch.

Približné náklady na analýzu PCR v rubľoch:

  • gonokok, gardnerella, trichomonas vaginalis – od 180
  • chlamydia trachomatis – od 190
  • papilomavírus - od 380 do 500
  • biocenóza urogenitálneho traktu u žien (kvantitatívne a kvalitatívne hodnotenie mikroflóry) – od 800.

Ešte užitočnejšie informácie o testovaní PCR sú uvedené vo videu nižšie:

Podstata diagnostickej metódy PCR

Metóda polymerázovej reťazovej reakcie (PCR) je založená na princípoch molekulárnej biológie a patrí do oblasti genetického výskumu.

Každý živý organizmus obsahuje vo svojej štruktúre molekuly nukleových kyselín - DNA a RNA. Toto je druh genetického pasu, ktorý pomáha určiť, ku ktorému druhu patrí jeden alebo druhý z jeho „nositeľov“. Na skenovanie tohto „pasu“ sa však donedávna vyžadoval určitý minimálny objem biologického materiálu. Ak bola koncentrácia DNA pod požadovanou úrovňou, diagnostická analýza nebola možná.

Pri diagnostike pomocou PCR sa vzorka biologického materiálu ošetrí špeciálnymi enzýmami (polymerázami), ktoré umožňujú spustiť proces viacerých kópií existujúcej DNA (RNA). Pomocou kaskády reťazových reakcií, podľa princípu geometrickej progresie, je možné v priebehu niekoľkých hodín získať niekoľko desiatok biliónov kópií z jednej molekuly nukleovej kyseliny. Tento objem je viac než dostatočný na vykonanie akýchkoľvek porovnávacích štúdií.

Na analýzu sa používa termocykler, v ktorom za prísnych teplotných podmienok dochádza k procesu viacnásobnej replikácie DNA. Zvyčajne stačí 20-30 replikačných cyklov. Každá z nich zahŕňa 3 po sebe nasledujúce fázy:

  • denaturácia - zahriatie matrice DNA na 96 °C s deštrukciou vodíkových väzieb medzi susednými reťazcami;
  • žíhanie - zníženie teploty o 4°C na vytvorenie replikačnej vidlice;
  • elongácia - spustenie DNA polymeráz na syntézu nových nukleotidových reťazcov založených na materskom reťazci.

Každý trojstupňový cyklus trvá v priemere 15-20 minút.

Výhody PCR diagnostiky

PCR analýza je high-tech a vyžaduje profesionalitu laboratórneho personálu, no pre modernú medicínu sa stala zdrojom nevídaných príležitostí v oblasti presnej diagnostiky.

Výhody PCR:

  • všestrannosť (možno preskúmať akýkoľvek biologický materiál - od krviniek, slín a vlasov až po podozrivé miesta na mieste činu);
  • vysoký prah citlivosti (metóda je schopná poskytnúť výsledky v prítomnosti jednotlivých buniek alebo jednotlivých molekúl DNA vo vzorke);
  • multitasking - v jednom prístupe môžete identifikovať niekoľko rôznych typov nosičov informácií naraz (bakteriologické metódy to nedokážu, pretože pre každý typ mikroorganizmu vyžadujú iné živné médiá);
  • schopnosť vykonávať presnú kvantitatívnu analýzu;
  • rýchlosť spracovania (na rozdiel od iných typov genetického výskumu trvá diagnostika PCR len 5-7 hodín);
  • presnosť výsledku (ak sa dodržiava technológia, chyba je prakticky eliminovaná);
  • relatívne nízke náklady (PCR analýza nepresahuje priemernú cenu štandardných testov).

Všetky tieto výhody umožňujú využiť polymerázovú reťazovú reakciu na pravidelné sledovanie procesu úpravy.

Nie nadarmo dostal vývojár diagnostickej metódy PCR Nobelovu cenu za svoje „mozgové dieťa“. Metóda polymerázovej reťazovej reakcie umožňuje:

  • určiť kmeň infekčného agens s minimálnym obsahom v biomateriáli (až po jednotlivé vírusové štruktúry);
  • vypočítajte presnú koncentráciu patogénu v celom tele (na určenie optimálnej dávky liekov);
  • posúdiť stupeň patologického vplyvu na pacienta a identifikovať kmene s vysokou farmakologickou rezistenciou;
  • stanoviť po sebe nasledujúce štádiá infekcie a urobiť ďalšiu prognózu.

Toto je zaujímavé! Možnosti PCR analýzy sú oveľa širšie ako kvantitatívne a kvalitatívne hodnotenie infekčného pozadia v ľudskom tele. Okrem identifikácie infekcií sa používa na stanovenie príbuzenstva, určenie identity, identifikáciu genetických patológií a porovnanie biomateriálov vo forenznej oblasti.

Aké infekcie dokáže PCR diagnostika odhaliť?

PCR analýza je schopná vysoká presnosť vypočítajte akýkoľvek infekčný nosič zahrnutý v modernom lekárskom katalógu chorôb:

  • patogény hepatitídy všetkých typov (PCR vám umožňuje identifikovať zdroj infekcie v štádiu inkubačnej doby a začať liečbu dlho predtým, ako sa objavia príznaky ochorenia);
  • patogény HIV a STD (ureaplazma, mykoplazma, chlamýdie, trichomonas);
  • skupina infekcií TORCH (relevantné pri vyšetrovaní tehotných žien na včasné zistenie patológií plodu);
  • tuberkulóza (latentná forma ochorenia);
  • kandidóza (latentná forma);
  • enterovírusová infekcia;
  • mononukleóza;
  • listerióza;
  • salmonelóza (určenie konkrétneho kmeňa);
  • papilomavírus;
  • gardnerelóza;
  • vírus kliešťová encefalitída.


Obzvlášť populárna je analýza na intracelulárne infekcie (napríklad chlamýdie), ktorých stanovenie je bežným spôsobom ťažké aj pri vysokej koncentrácii týchto mikroorganizmov v tkanivách pacienta.

Vzhľadom na multitaskingový charakter metódy je možné vykonať simultánnu PCR analýzu pre 12 základných infekcií. Integrovaný prístup je vhodnou voľbou pre rutinné vyšetrenie tela na sexuálne prenosné infekcie s minimálnym rizikom nesprávnej diagnózy.

Na poznámku! Pomocou PCR diagnostiky sa robí predpoveď pre takzvané „spiace“ formy infekcií, ktoré sú v tele bez prejavov príznakov ochorenia (dôležité najmä pri liečbe gynekologických a urologických ochorení, tuberkulózy, kliešťov). encefalitída, papilomavírus).

Aké biologické materiály sa študujú?

Neexistujú žiadne stanovené normy ani hranice. Všestrannosť metódy vám umožňuje použiť na analýzu akýkoľvek biologický materiál:

  • vaginálny náter, škrabanie z močovej trubice a cervikálneho kanála (na diagnostiku STD);
  • moč (tuberkulóza, niektoré pohlavne prenosné choroby, cytomegalovírus);
  • krv (HIV, hepatitída, infekcie TORCH);
  • výter z hrdla (mononukleóza, cytomegalovírus);
  • cerebrospinálny mok (neuroinfekcie)
  • plodová voda a placentárne tkanivo (analýza infekcií TORCH na prevenciu patológií vývoja plodu);
  • pleurálna tekutina (pľúcne infekcie).

Pre iné typy PCR diagnostiky (stanovenie vzťahov, porovnávanie biomateriálov) sa využívajú sliny, vlasy, nechty, epitelové bunky a iné zdroje genetickej informácie.

Na poznámku! Pomocou diagnostickej metódy PCR sa patogény zisťujú nielen v živých tkanivách, ale aj vo vzorkách pôdy, vody a rastlinných substrátov; posúdiť patogénnu aktivitu mikroorganizmov v ľudskom tele aj v jeho prostredí (prítomnosť identifikovaného zdroja ochorenia umožní prijať vhodné opatrenia na jeho prevenciu v budúcnosti).

Ako sa pripraviť na test

Pacienti našej kliniky sa nemusia pýtať, kde sa nechať otestovať na PCR. Zabezpečujeme všetky podmienky pre sterilný odber materiálu a jeho odoslanie do laboratória.

Nie je potrebné žiadne špeciálne školenie, ale zoznam všeobecné odporúčania je vhodné dodržiavať. Na pár dní sa vzdajte alkoholu, obmedzte fajčenie, ak je to možné, vylúčte lieky, snažte sa vyhnúť stresovým situáciám a ťažkej fyzickej aktivite.

V opačnom prípade príprava na analýzu závisí od typu biomateriálu:

  • pred vykonaním náteru alebo škrabania na urogenitálne infekcie sa 2-3 dni zdržia pohlavného styku (ženy by sa mali uistiť, že deň testu nepripadne na ich menštruáciu);
  • pred vykonaním krvného testu na PCR sa zdržte ranného jedla (test sa vykonáva na prázdny žalúdok) a vypite pohár čistej neperlivej vody;
  • Pred darovaním moču sa zdržte potravín, ktoré ovplyvňujú kyslosť moču (ovocie, mäso, strukoviny, zelenina).

Dôležité! Najdôležitejšou požiadavkou v PCR diagnostike infekcií je čistota biomateriálu. Snažte sa preto vynaložiť maximálne úsilie, aby ste zabránili kontaminácii tkanív cudzou DNA (dbajte na sterilitu prepravného kontajnera, osobnú hygienu, dostupnosť čistého oblečenia).

Vysvetlenie analýzy PCR

Výsledky kvalitatívnej PCR analýzy infekcií sú prezentované vo forme tabuľky, kde pred každým infekčným agensom je zodpovedajúca značka:

  • negatívny výsledok (neexistuje žiadny patogén tohto typu);
  • pozitívny výsledok (zistený patogén).

Absencia príznakov ochorenia nemusí zodpovedať skutočnému obrazu, takže výsledky testov budú pre niektorých neočakávané. Nie je potrebné sa rozčuľovať: identifikácia pôvodcu infekcie v počiatočných štádiách je kľúčom k úspešnému a rýchlemu vyliečeniu.

Pri vykonávaní kvantitatívnej analýzy PCR môžete odhadnúť stupeň vírusovej záťaže (zistiť počet kópií vírusu na jednotku objemu). Vďaka tomuto typu štúdie je možné určiť intenzitu infekčného procesu, ako aj vyhodnotiť účinnosť liečby.

PCR analýza: cena a načasovanie

Priemerná doba diagnostiky je 5-10 hodín. Výsledky vo forme tabuľky sú vystavené hneď nasledujúci pracovný deň po odbere biomateriálu.

Pri výbere PCR analýzy nie je cena zásadným problémom. V priemere náklady nepresahujú konvenčné biochemické testy a na rozdiel od väčšiny genetických štúdií sú dostupné všetkým pacientom.

Polymerázová reťazová reakcia (PCR) je vysoko presná molekulárno-genetická diagnostická metóda, ktorá umožňuje identifikovať rôzne infekčné a dedičné ochorenia u ľudí v akútnom aj chronickom štádiu a dlho predtým, než sa ochorenie prejaví.

Polymerázovú reťazovú reakciu (PCR) vyvinul Kary Mullis (USA) v roku 1983, za čo mu bola v roku 1993 udelená Nobelova cena za chémiu.

PCR analýza sa stala akýmsi „zlatým štandardom“ pre väčšinu infekcií. Väčšina špecialistov sa s ňou stretáva takmer každý deň a nevie si bez nej predstaviť stanovenie konečnej diagnózy. PCR sa často stáva jedinou reakciou na identifikáciu aktívnych štádií ochorenia v čase, keď iné bakteriologické, virologické a imunologické diagnostické metódy nefungujú.

Výhody PCR diagnostiky v modernej medicíne:

Priama detekcia prítomnosti patogénu (konkrétne špecifickej oblasti DNA alebo RNA patogénu) v testovanej vzorke.
Vysoká špecifickosť umožňuje určiť jedinečnú časť DNA alebo RNA charakteristickú pre konkrétny patogén, čo eliminuje možnosť falošných reakcií.
Vysoká citlivosť metódy PCR umožňuje odhaliť aj jednotlivé bunky patogénov (vírusy, baktérie). Citlivosť PCR analýzy je 10-1000 buniek v testovanej vzorke (napríklad citlivosť imunologických a mikroskopických testov je len 103-105 buniek).
Vývoj univerzálnej techniky PCR na detekciu rôznych patogénov. Predmetom výskumu metódou PCR je genetický materiál (DNA, RNA) patogénu. Táto technika vám umožňuje identifikovať niekoľko patogénov z jednej biologickej vzorky.
Prijímajte výsledky analýzy pomerne rýchlo. Úplné vyšetrenie sa vykonáva za 4-4,5 hodiny, menej často - o niečo dlhšie.
Možnosť detekcie patogénov pred nástupom príznakov ochorenia (predklinická diagnostika) a po minulé ochorenie(retrospektívna diagnóza). Príkladom predklinickej diagnostiky môže byť vyšetrenie počas inkubačnej doby (od okamihu infekcie, kým sa pacient sťažuje), ako aj latentná infekcia (keď nie sú žiadne príznaky, ale iba laboratórne údaje - napríklad PCR). Jedným z dôležitých aspektov diagnostiky PCR je vykonávanie PCR v archívnom materiáli alebo biologických pozostatkoch, čo je dôležité pre identifikáciu osobnosti alebo otcovstva.

V súčasnosti prechádza diagnostika PCR výrazným rozvojom. Samotná metóda sa zdokonaľuje, stále sa objavujú nové odrody PCR a na lekársky trh vstupujú nové testovacie systémy pre túto reakciu. Vďaka tomu sú náklady na PCR štúdie každým rokom dostupnejšie pre široké spektrum pacientov.

Na čom je založená metóda PCR?

Základom polymerázovej reťazovej reakcie je opakované zdvojenie (amplifikácia) určitého úseku DNA alebo RNA pomocou enzýmov v laboratóriu. V dôsledku toho sa vytvorí množstvo DNA alebo RNA dostatočné na vizuálnu analýzu. Počas štúdie sa skopíruje iba oblasť, ktorá vyhovuje špecifikovaným podmienkam, a to iba vtedy, ak je prítomná v testovacej vzorke.

Napríklad materiál na výskum, pri ktorom sa predpokladá prítomnosť fragmentov DNA alebo RNA patogénu (sliny, krv, moč, výtok z pohlavných orgánov), sa umiestni do špeciálneho reaktora (zosilňovača). Ďalej sa k nemu pridajú špecifické enzýmy, ktoré sa naviažu na DNA alebo RNA patogénu a syntetizuje sa jeho kópia. Toto kopírovanie prebieha v niekoľkých fázach ako „reťazová reakcia“ a nakoniec sa z jednej kópie genetického materiálu môžu vytvoriť stovky a tisíce kópií. Potom nasleduje analýza a porovnanie výsledku s existujúcou databázou o štruktúre rôznych patogénov. Pomocou PCR môžete nielen identifikovať typ patogénu, ale tiež poskytnúť kvantitatívny výsledok analýzy, to znamená, koľko patogénov je v ľudskom tele.

Metóda PCR v súčasnosti rozširuje možnosti výskumu: zavádzanie mutácií, zostrih fragmentov DNA a v medicíne sa rozšírila napríklad na stanovenie otcovstva, vznik nových génov atď.

Aké infekcie možno zistiť pomocou diagnostiky PCR?

1) HIV infekcia (dá sa zistiť vírus ľudskej imunodeficiencie HIV-1)
2) Vírusová hepatitída A, B, C, G (RNA-HAV, DNA-HBV, RNA-HCV, RNA-HGV)
3) Infekčná mononukleóza (DNA vírusu Epstein-Barrovej – EBV)
4) Cytomegalovírusová infekcia (DNA-CMV)
5) Herpetická infekcia (DNA herpes simplex vírus HSV typu 1 a 2)
6) STI (pohlavne prenosné infekcie) – ureaplazmóza, gardnerelóza, chlamýdie, mykoplazmóza, trichomoniáza,
7) Tuberkulóza (Mycobacterium tuberculosis)
8) Onkogénne vírusy - papilomavírusová infekcia (ľudský papilomavírus (vrátane jeho onkogénnych typov 16, 18, 31, 33, 45, 51, 52, 56, 58 a 59)
9) Borelióza, kliešťová encefalitída
10) Listerióza
11) Kandidóza (huby rodu Candida)
12) Infekcia Helicobacter pylori
a ďalšie

Vzhľadom na rozsah patogénov sa diagnostika PCR aktívne využíva v gynekologickej, urologickej praxi, infekčnej praxi, pneumológii, ftizeológii, gastroenterológii, hematológii, onkológii a ďalších.

Materiál na výskum a pravidlá jeho zberu

Materiálom pre PCR výskum, v ktorom je možné detegovať cudzorodú bakteriálnu DNA alebo vírusovú DNA či RNA, môžu byť rôzne biologické médiá a ľudské tekutiny: hlien, moč, krv, spútum, zoškraby z epitelových buniek, placentárne tkanivo, krv, šťava prostaty, atď. plodová voda, pleurálna tekutina.

Pri skríningu sexuálne prenosných infekcií (STI) sú muži a ženy testovaní na genitálne sekréty, ster alebo škrabanie z krčka maternice, ster alebo škrabanie z močovej trubice a moču.

Pri vyšetrovaní infekcií (herpetické infekcie, CMV, mononukleóza, toxoplazmóza, hepatitída B, C, infekcia HIV) sa odoberá krv na PCR.

Na diagnostiku infekčnej mononukleózy, CMV alebo herpetickej infekcie sa odoberie výter z hrdla a odoberie sa moč na testovanie na CMV. Často na vyšetrenie lézie nervový systém V rade štúdií sa odoberá cerebrospinálny mok.

V pulmonológii sa ako materiál používa spútum a pleurálna tekutina.

Pri vyšetrení na vnútromaternicové infekcie - plodová voda, placentárne tkanivo.

Príprava na dodávku materiálu a PCR diagnostika

Takmer všetci pacienti, ktorí podstúpia diagnostiku PCR, majú právo počítať so spoľahlivým, presným a rýchlym výsledkom, ktorý do značnej miery závisí od možností laboratória a profesionality laboratórneho lekára. Mnohí si zároveň nemyslia, že práve táto spoľahlivosť do značnej miery závisí od nás samých, konkrétne od odporúčaní ošetrujúceho lekára, životného štýlu a správnosti odberu materiálu. Pri odbere materiálu sa vyžadujú podmienky, ktoré vylučujú kontamináciu (kontamináciu) materiálu a tým spochybňujú objektivitu analýzy.

Správna príprava na odovzdanie materiálu nie je nijak zvlášť náročná. Pre pacientov existujú nasledujúce odporúčania lekárov:

1) nebyť sexuálne aktívny jeden deň pred odoslaním materiálu;
2) krv na testovanie sa daruje ráno nalačno (nejedzte a nepite);
3) pri darovaní moču sa prvá ranná porcia odoberá do čistej sterilnej nádoby.

Čas pripravenosti na analýzu PCR

Konečný výsledok je pripravený 1,5-2 dni po predložení materiálu. V niektorých prípadoch je výsledok pripravený už v prvý deň.

Interpretácia výsledkov PCR

Negatívne výsledok PCR naznačuje, že v testovacom materiáli sa v čase doručenia nenašli žiadne stopy infekčných agens. Väčšina prípadov ukazuje neprítomnosť infekcie, ktorá sa pokúšala nájsť v testovanej vzorke.

Pozitívny výsledok PCR indikuje detekciu stôp infekcie v testovanej biologickej vzorke. S veľkou presnosťou pozitívny výsledok indikuje prítomnosť infekcie v tento momentčas.

Existujú situácie, keď sa PCR ukáže ako pozitívna, ale nemožno hovoriť o aktívnej infekcii - ide o takzvaný „zdravý nosič“ bez klinických príznakov ochorenia, ktorý si nevyžaduje liečbu, ale vyžaduje si dynamické sledovanie lekárom. . Častejšie sa pozoruje pri množstve vírusových infekcií (HPV, CMV infekcia, EBV infekcia, herpetická infekcia a iné) v materiáloch, ako sú sliny, škrabance z cervikálneho kanála, močovej trubice, teda z lokálneho ohniska. Nesmieme však zabúdať, že prenos infekcie z nosičov na zdravých ľudí je možný, rovnako ako prechod na chronickú formu ochorenia s aktiváciou procesu. Ak je PCR v krvi pozitívna, potom to už nie je nosič a vyžaduje si špecifickú liečbu.

Kvantitatívny výsledok PCR posudzuje iba lekár individuálne pre konkrétnu infekciu samostatne a nemá všeobecné gradácie. Na základe kvantitatívneho výsledku PCR dokáže lekár určiť stupeň aktivity infekcie a nastaviť štádium ochorenia, ktoré určite ovplyvní priebeh a dávky predpísaných liekov.

Jedna z posledných vzrušujúcich otázok: aká presná je diagnostika PCR?

Existujú 3 definície analýzy PCR:

1. Presnosť (s vysokou mierou pravdepodobnosti je možné infekciu odhaliť alebo sa jej vyhnúť).
2. Špecifickosť (presnosť detekcie konkrétnej infekcie).
3. Citlivosť (aj pri nízkom obsahu genetického materiálu patogénov v testovanej vzorke sa zistí infekcia).

Polymerázová reťazová reakcia prakticky nespôsobuje falošne pozitívne výsledky (to znamená, že neexistujú žiadne pozitívne vzorky, kde nie je infekcia). Falošne negatívne výsledky sú zriedkavé (najčastejšie kvôli absencii aktívnej infekcie u osoby v súčasnosti). Napríklad latentná infekcia, chronická infekcia bez aktivity.

Lekárka infekčnej choroby N.I. Bykova

Video o tom, prečo a ako vykonať test PCR na infekcie

PCR analýza, málokto vie, čo to je, hoci dnes je to jedna z inovatívnych metód diagnostiky infekčných chorôb, za ktorú jej vývojár dostal v roku 1993 Nobelovu cenu. Táto high-tech metóda vám umožňuje odhaliť vážnych chorôb v počiatočnom štádiu a začať ich liečbu včas.

Analýza je založená na princípoch molekulárnej biológie. Výskum PCR zahŕňa použitie špeciálneho enzýmu, ktorý pod vplyvom teplotné podmienky, kopíruje RNA a DNA baktérií a vírusov prítomných v zozbieranom biomateriáli. Takáto masová reprodukcia umožňuje lekárovi presne určiť, k akému druhu patrí baktéria, ktorá spôsobila ochorenie, ako aj zmerať úroveň jej koncentrácie v biomateriáli. Postup kopírovania sa vykonáva v špeciálnom zariadení - tepelnom cyklovači, ktorý ohrieva a ochladzuje skúmavky so zozbieraným materiálom, čím sa vytvárajú vhodné podmienky na replikáciu.

Testovanie PCR sa vykonáva z mnohých dôvodov, ale najčastejšie sa používa na určenie prítomnosti infekčných chorôb, ako sú:

  • herpes;
  • sexuálne prenosné infekcie - chlamýdie, ureaplazmóza, gardnerelóza, trichomoniáza;
  • kandidóza;
  • hepatitída;
  • mononukleóza;
  • listerióza;
  • cytomegalovírus;
  • tuberkulóza;
  • ľudský papilomavírus;
  • kliešťová encefalitída.

Analýza PCR sa neobmedzuje len na jej použitie v medicíne; skríning sa často vykonáva, ak je potrebné pochopiť, kto vlastní biologický materiál nájdený na mieste činu, to znamená, že analýza PCR sa vo forenznej vede široko používa. Treba poznamenať, že ak je potrebné určiť otcovstvo, na PCR sa odoberie náter alebo krv. Výsledky diagnostiky PCR nie sú v žiadnom prípade horšie ako obvyklá analýza príbuzenstva DNA a sú oveľa lacnejšie.

Diagnostické vlastnosti

PCR analýza má obrovské množstvo pozitívnych aspektov. V prvom rade je dôležité si všimnúť citlivosť testu. PCR analyzátor je schopný detekovať molekuly bakteriálnej DNA aj v malých množstvách, to znamená, že lekár dostáva informácie o skoré štádium ochorenie alebo nástup chronickej formy ochorenia. Krvný test PCR môže dokonca určiť prítomnosť infekčného ochorenia, ktoré je v latentnej forme a nijako sa neprejavuje.

Je potrebné poznamenať, že analýza PCR u mužov a žien sa môže vykonávať v prítomnosti akéhokoľvek typu materiálu, nemusí to byť krv alebo náter, sliny, kožné bunky a dokonca aj moč.

Výsledky PCR testov môžu byť rozsiahle, keďže PCR diagnostika infekcií dokáže zachytiť hneď niekoľko patogénov, ktoré sa nachádzajú v jednej vzorke biomateriálu. Vyšetrenie je možné dokončiť v ľubovoľnom vhodnom čase, čo analýza ukazuje, že človek môže zistiť v krátkom čase, pretože diagnostické výsledky biomateriálu sú pripravené do 5 hodín.

Všetci lekári súhlasia s tým, že krvný test na PCR alebo iný materiál nikdy nedáva falošné výsledky, ak sa správne dodržiava diagnostická metodika. PCR pozitívna alebo PCR negatívna môže byť falošná iba vtedy, ak pracovníci laboratória nemajú vysokú profesionalitu. Ak bol zaistený biomateriál kontaminovaný alebo bol nesprávne skladovaný, interpretácia analýzy PCR môže mať skreslené výsledky.

Príprava na diagnostiku

PCR náter sa odoberá z krčka maternice žien, ak je potrebné určiť sexuálne prenosné choroby, napríklad chlamýdie, ureaplazmu alebo herpes. Ak sa na mužovi vyžaduje testovanie PCR na tieto baktérie, odoberie sa mu výtok z močovej trubice – inými slovami prostatická šťava. Krv sa testuje pomocou metódy PCR, ak chcú určiť hepatitídu, toxoplazmózu a HIV. Test PCR sa vykonáva na mononukleózu a cytomegalovírus odstránením tampónu z hrdla. Polymerázová reťazová reakcia na prítomnosť pľúcnych infekcií sa uskutočňuje za prítomnosti biomateriálu, ako je spútum alebo pleurálna tekutina.

PCR sa robí počas tehotenstva, ak existuje podozrenie na vnútromaternicové infekcie, ako aj choroby a patológie nervového systému plodu. Placentárne tkanivo sa odoberá tehotnej žene ako biomateriál na výskum. Ak má človek poškodenie nervového systému, vyšetruje sa cerebrospinálny mok. Na identifikáciu baktérií, ako je Helicobacter pylori, sa používajú biopsie žalúdka a dvanástnika.

Často sa používa aj test moču PCR, ale je menej výhodný ako krvný test. Umožňuje vám vidieť prítomnosť patogénnych mikroorganizmov, ktoré vyvolávajú infekčné ochorenia, ale nedokáže uviesť ich presný počet a stupeň vývoja ochorenia. PCR moču sa používa, ak z nejakého dôvodu nie je možné odstrániť krv alebo urobiť náter. Treba tiež poznamenať, že PCR v moči možno použiť na štúdium infekcií u malých detí. Test moču môže tiež určiť prítomnosť infekcie a zápalu v močového mechúra, identifikovať kamene, piesok, ako aj cystitídu a uretritídu.

Ako je uvedené vyššie, môžete vykonať test PCR, ak máte nejaký biomateriál. PCR analýza, viete, čo to je, musíte sa tiež vedieť pripraviť na diagnostiku. Príprava priamo závisí od toho, čo sa má odstrániť, napríklad musíte darovať moč po dôkladnej rannej hygiene pohlavných orgánov. Krv sa daruje nalačno, počas darovania, alebo skôr deň predtým, musíte prestať užívať akékoľvek lieky. Ak existujú chronické ochorenia, o zozname schválených liekov na použitie rozhoduje individuálne ošetrujúci lekár.

Rozbor stolice sa vykonáva ráno po dôkladnej príprave. V predvečer testu je potrebné vyhnúť sa ťažkým jedlám a vykonať dôkladnú hygienu genitálií. Analýza stolice bude nespoľahlivá, ak sa biomateriál odstránil pomocou klystíru, je potrebný prirodzený zostup materiálu. Na darovanie slín nie je potrebná žiadna príprava, stačí prestať fajčiť alebo piť citrusovú šťavu.

Pred predložením biomateriálu na určenie chorôb, ktoré sa prenášajú sexom, sa od pacientov vyžaduje, aby dva dni pred diagnózou PCR vylúčili sexuálny kontakt. Ženy majú zakázané odoberať ster z krčka maternice počas menštruácie dva dni po menštruácii, inak bude mať interpretácia PCR skreslené informácie.

Výsledky skríningu

Len kvalifikovaný lekár môže podrobne vysvetliť, čo analýza PCR hovorí o stave konkrétneho pacienta, nebude ľahké nezávisle pochopiť údaje uvedené vo formulári. Ak požiadate lekára o dešifrovanie údajov, v prvom rade povie, či je výsledok pozitívny alebo negatívny. Ak je analýza negatívna, znamená to, že osoba je zdravá a v testovanom materiáli sa nenašli žiadne baktérie. V prípade pozitívneho výsledku je uvedený presný typ patogénu a jeho množstvo, presné obdobie, kedy k infekcii došlo, zistíte aj prítomnosťou určitých imunoglobulínov.

Existuje niekoľko tried imunoglobulínov, ktoré môžu jasne odrážať stav pacienta:

  1. IgG sa vyvinie v krvi do 4 týždňov od infekcie a môže zostať v krvi až niekoľko rokov. Nie sú vždy indikátormi baktérií; niekedy slúžia ako pamäť tela, že sa raz stretli s podobným typom patogénu.
  2. IgM - objavujú sa na samom začiatku po infekcii. Spravidla sú viditeľné už na 5. deň, sú to prví obrancovia tela, ktorí baktériu napadnú. Z výsledku krvi zmiznú po dvoch týždňoch. Ak sú prítomné v krvnom teste, potom sa dá predpokladať, že k infekcii došlo pomerne nedávno, asi pred týždňom.
  3. IgA signalizuje akútny rozvoj bakteriálnej infekcie v organizme alebo recidivujúce štádium chronického ochorenia.

Existuje množstvo prípadov, keď rozbor ukazuje pozitívny výsledok, ale človek sa vôbec necíti zle. Vôbec to neznamená diagnostickú chybu, skôr ide o chronickú formu ochorenia, ktorá je spiaca alebo sa vývoj ochorenia ešte len začína. V tomto čase nie je dostatok baktérií, ktoré môžu vyvolať príznaky.

Teraz poznáte princíp analýzy a môžete požiadať o túto diagnózu, ak existuje najmenšie podozrenie na infekčné ochorenie. Trvanie ďalšej liečby a jej účinnosť priamo závisí od toho, ako rýchlo podstúpite diagnostiku, ktorá je prakticky bezbolestná. Aby ste si neustále udržiavali zdravie dobrá úroveň, odporúča sa raz ročne absolvovať preventívnu PCR diagnostiku na prítomnosť pohlavne prenosných chorôb, ako aj infekcií iných orgánov. Je lepšie chorobe predchádzať, ako neskôr riešiť jej následky.