Πόσες ημέρες διαρκεί μια εξέταση PCR για μόλυνση; Ανάλυση PCR. Πώς να πάρετε ένα επίχρισμα για ΣΜΝ

Η αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης (PCR) είναι μια μέθοδος υψηλής ακρίβειας στον τομέα της διάγνωσης κληρονομικών παθολογιών, λοιμώξεων, ιογενών ασθενειών σε οποιοδήποτε στάδιο (οξύ ή χρόνιο), καθώς και - σε πρώιμο στάδιο - πριν από εμφανείς εκδηλώσεις της νόσου με ταυτοποίηση παθογόνα με βάση το DNA τους, το RNA, που είναι γενετικό υλικό, σε δείγματα που λαμβάνονται από τον ασθενή. Και σήμερα θα μιλήσουμε για την ουσία, τα διαγνωστικά στάδια και τις αρχές των μεθόδων αλυσιδωτής αντίδρασης πολυμεράσης (PCR), καθώς και για το κόστος της.

Τι είναι η αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης

Η βάση της ανάλυσης είναι η ενίσχυση (διπλασιασμός) - η δημιουργία πολλών αντιγράφων από ένα σύντομο τμήμα DNA (δεοξυριβονουκλεϊκό οξύ), το οποίο αντιπροσωπεύει το ανθρώπινο γενετικό σύμπλεγμα. Η μελέτη απαιτεί πολύ μικρή ποσότητα φυσιολογικής ουσίας (πτύελα, κόπρανα, επιθηλιακές αποξέσεις, χυμός προστάτη, αίμα, σπέρμα, αμνιακό υγρό, βλέννα, ιστός πλακούντα, ούρα, σάλιο, υπεζωκοτικό υγρό, εγκεφαλονωτιαίο υγρό). Σε αυτή την περίπτωση, για παράδειγμα, μπορεί να ανιχνευθεί ακόμη και ένα μόνο επιβλαβές μικρόβιο στο ουρογεννητικό σύστημα του ασθενούς.

Η τεχνική PCR (αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης) αναπτύχθηκε από τον Αμερικανό επιστήμονα K. Mullis, ο οποίος έλαβε το βραβείο Νόμπελ το 1993.

Χρησιμοποιείται ενεργά:

• στην έγκαιρη διάγνωση λοιμώξεων, γενετικές?
• στην ιατροδικαστική εξέταση όταν υπάρχει εξαιρετικά μικρή ποσότητα DNA διαθέσιμη για εξέταση·
• στην κτηνιατρική, τη φαρμακευτική, τη βιολογία, τη μοριακή γενετική.
• για αναγνώριση ατόμου με DNA, επιβεβαίωση πατρότητας·
• στην παλαιοντολογία, την ανθρωπολογία, την οικολογία (κατά την παρακολούθηση της ποιότητας των προϊόντων, περιβαλλοντικοί παράγοντες).

Αυτό το βίντεο θα σας πει λεπτομερώς τι είναι μια αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης:

Σε ποιον συνταγογραφείται;

Η αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης στη διάγνωση μολυσματικών ασθενειών είναι μια από τις πιο αξιόπιστες μεθόδους ιδιαίτερης ακρίβειας και αξιοπιστίας. Για παράδειγμα, η αξιοπιστία της ανάλυσης PCR για χλαμύδια και πολλά άλλα παθογόνα είναι κοντά στο 100% (απόλυτη). Τις περισσότερες φορές, η διαδικασία αλυσιδωτής αντίδρασης πολυμεράσης συνταγογραφείται σε ασθενείς που δυσκολεύονται να αναγνωρίσουν ένα συγκεκριμένο παθογόνο κατά τη διάγνωση.

Η εργαστηριακή εξέταση PCR χρησιμοποιείται:

• για τον εντοπισμό παθογόνων παραγόντων που προκαλούν λοιμώξεις των ουροποιητικών και γεννητικών οργάνων που είναι δύσκολο να εντοπιστούν με καλλιέργεια ή ανοσολογικές μεθόδους·
• για επαναδιάγνωση του HIV στο αρχικό στάδιο σε περίπτωση θετικού αλλά αμφίβολου αποτελέσματος της αρχικής εξέτασης (για παράδειγμα, σε νεογέννητα από γονείς μολυσμένους με AIDS).
• για τη δημιουργία Καρκίνοςσε πρώιμο στάδιο (μελέτη ογκογονικών μεταλλάξεων) και ατομική διόρθωση του θεραπευτικού σχήματος για έναν συγκεκριμένο ασθενή.
• με σκοπό την έγκαιρη ανίχνευση και πιθανή θεραπεία κληρονομικών παθολογιών.

Έτσι, οι μελλοντικοί γονείς κάνουν ένα τεστ για να διαπιστώσουν εάν είναι φορείς μιας γενετικής παθολογίας· στα παιδιά, η PCR καθορίζει την πιθανότητα έκθεσης σε μια ασθένεια που μεταδίδεται κληρονομικά.

• για την ανίχνευση παθολογιών του εμβρύου νωρίςκύηση (μεμονωμένα κύτταρα του αναπτυσσόμενου εμβρύου εξετάζονται για πιθανές μεταλλάξεις).
• σε ασθενείς πριν από τη μεταμόσχευση οργάνων - για "τυποποίηση ιστού" (καθορισμός συμβατότητας ιστού).
• για τον εντοπισμό επικίνδυνων παθογόνων οργανισμών στο αίμα του δότη.
• στα νεογέννητα - για τον εντοπισμό κρυφών λοιμώξεων.
• για την αξιολόγηση των αποτελεσμάτων της αντιιικής και αντιμικροβιακής θεραπείας.

Γιατί να υποβληθείτε σε μια τέτοια διαδικασία;

Δεδομένου ότι η PCR είναι μια εξαιρετικά αποτελεσματική διαγνωστική μέθοδος, η οποία δίνει σχεδόν 100% αποτελέσματα, χρησιμοποιείται η διαδικασία:

• να επιβεβαιώσει ή να αποκλείσει την τελική διάγνωση·
• ταχεία αξιολόγηση της αποτελεσματικότητας της θεραπείας.

Σε πολλές περιπτώσεις, η PCR είναι η μόνη δυνατή εξέταση για την ανίχνευση μιας αναπτυσσόμενης νόσου εάν άλλες βακτηριολογικές, ανοσολογικές και ιολογικές διαγνωστικές μέθοδοι είναι άχρηστες.

• Οι ιοί ανιχνεύονται χρησιμοποιώντας μια διαδικασία PCR αμέσως μετά τη μόλυνση και πριν εμφανιστούν σημεία ασθένειας. Η έγκαιρη ανίχνευση του ιού επιτρέπει την έγκαιρη θεραπεία.
• Το λεγόμενο «ιικό φορτίο» (ή ο αριθμός των ιών στο σώμα) προσδιορίζεται επίσης με ανάλυση DNA χρησιμοποιώντας μια ποσοτική μέθοδο.
• Συγκεκριμένα παθογόνα (π.χ. ο βάκιλος της φυματίωσης του Koch) είναι δύσκολοι και αργούν πολύ να καλλιεργηθούν. Η δοκιμή PCR επιτρέπει την ταχεία ανίχνευση ελάχιστων παθογόνων (ζωντανών και νεκρών) σε δείγματα κατάλληλα για δοκιμή.

Χρησιμοποιείται λεπτομερής ανάλυση DNA παθογόνου:

• να προσδιορίσει την ευαισθησία του σε συγκεκριμένους τύπους αντιβιοτικών, γεγονός που επιτρέπει την άμεση θεραπεία.
• για τον έλεγχο της εξάπλωσης των επιδημιών μεταξύ οικόσιτων και άγριων ζώων·
• για τον εντοπισμό και την παρακολούθηση νέων ΔΙΑΦΟΡΕΤΙΚΟΙ ΤΥΠΟΙμικρόβια και υποτύπους παθογόνων που έχουν προκαλέσει προηγούμενες επιδημίες.

Τύποι διαγνωστικών

Τυπική μέθοδος

Η ανάλυση αλυσιδωτής αντίδρασης πολυμεράσης πραγματοποιείται με βάση την πολλαπλή ενίσχυση (διπλασιασμό) ενός συγκεκριμένου θραύσματος DNA και RNA χρησιμοποιώντας ειδικά ένζυμα εκκινητών. Ως αποτέλεσμα της αλυσίδας αντιγραφής, λαμβάνεται επαρκής ποσότητα υλικού για έρευνα.

Κατά τη διάρκεια της διαδικασίας, αντιγράφεται μόνο το επιθυμητό θραύσμα (που αντιστοιχεί στις καθορισμένες ειδικές συνθήκες) και εάν υπάρχει πράγματι στο δείγμα.

Αυτό το λεπτομερές βίντεο με χρήσιμα διαγράμματα εξηγεί πώς λειτουργεί η PCR:

Άλλες μέθοδοι

• PCR σε πραγματικό χρόνο. Σε αυτό το είδος έρευνας, η διαδικασία αναγνώρισης ενός δεδομένου θραύσματος DNA ξεκινά μετά από κάθε κύκλο και όχι μετά την ολοκλήρωση ολόκληρης της αλυσίδας των 30 - 40 κύκλων. Αυτός ο τύπος έρευνας σάς επιτρέπει να λάβετε πληροφορίες σχετικά με την ποσότητα ενός παθογόνου (ιού ή μικροβίου) στο σώμα, δηλαδή να πραγματοποιήσετε μια ποσοτική ανάλυση.
• RT-PCR (λειτουργία αντίστροφης μεταγραφής). Αυτή η δοκιμή χρησιμοποιείται για την αναζήτηση μονόκλωνου RNA για την ανίχνευση ιών των οποίων η γενετική βάση είναι το RNA (για παράδειγμα, ιός ηπατίτιδας C, ιός ανοσοανεπάρκειας). Σε αυτή τη μελέτη, χρησιμοποιείται ένα ειδικό ένζυμο - η αντίστροφη μεταγραφάση και ένας ειδικός εκκινητής, και το μονόκλωνο DNA κατασκευάζεται με βάση το RNA. Στη συνέχεια ο δεύτερος κλώνος DNA ανακτάται από αυτόν τον κλώνο και εκτελείται η τυπική διαδικασία.

Ενδείξεις για δοκιμές

Η διαδικασία PCR χρησιμοποιείται στην κλινική λοιμωδών νοσημάτων, νεογνολογίας, μαιευτικής, παιδιατρικής, ουρολογίας, γυναικολογίας, αφροδισιολογίας, νευρολογίας, νεφρολογίας και οφθαλμολογίας.

Ενδείξεις για δοκιμή:

• τον προσδιορισμό του κινδύνου ανάπτυξης γενετικών ανωμαλιών σε ένα παιδί με πιθανότητα κληρονομικών παθολογιών.
• διάγνωση και των δύο γονέων κατά τον προγραμματισμό εγκυμοσύνης ή της σοβαρής κατάστασης της μητέρας κατά τη διάρκεια μιας συνεχιζόμενης εγκυμοσύνης.
• δυσκολίες με τη σύλληψη, τον εντοπισμό των αιτιών της υπογονιμότητας.
• υποψία σεξουαλικά μεταδιδόμενων λοιμώξεων στο οξύ στάδιο και με συμπτώματα μετάβασής τους σε χρόνια.
• ανίχνευση αιτιών φλεγμονωδών διεργασιών άγνωστης προέλευσης.
• απροστάτευτες περιστασιακές και τακτικές σεξουαλικές επαφές.
• προσδιορισμός της ευαισθησίας ενός παθογόνου μικροοργανισμού σε συγκεκριμένα αντιβιοτικά.
• ασθενείς με υποψία λανθάνουσας λοίμωξης για την ανίχνευση παθογόνων παραγόντων πριν από την ανάπτυξη εμφανών συμπτωμάτων (προκλινική διάγνωση).
• ασθενείς για επιβεβαίωση της ανάρρωσης μετά από ασθένεια (αναδρομική διάγνωση):

Τα διαγνωστικά χρησιμοποιούνται επίσης εάν είναι απαραίτητο να εντοπιστούν με ακρίβεια τα ακόλουθα παθογόνα:

• ιοί ηπατίτιδας (A B C G), ανθρώπινη ανοσοανεπάρκεια, κυτταρομεγαλοϊός;
• Vibrio cholerae;
• ιός απλού έρπητα, ερπητοειδές είδος.
• ρετρό - αδενο - και ρινοϊοί.
• ιοί ερυθράς, Epstein-Barr, ανεμευλογιάς (Zoster).
• parvo και picornoviruses?
• βακτήριο Helicobacter pylori;
• Legionella, παθογόνοι τύποι Escherichia coli.
• Η ασθένεια του σταφυλοκοκου;
• παθογόνο;
• κλωστρίδια, διφθερίτιδα και αιμόφιλος influenzae.

Χρησιμοποιείται επίσης για τον προσδιορισμό λοιμώξεων:

• Λοιμώδης μονοπυρήνωση;
• μπορελίωση, λιστερίωση, εγκεφαλίτιδα που μεταδίδεται από κρότωνες.
• καντιντίαση που προκαλείται από μύκητες Candida.
• σεξουαλικά μεταδιδόμενες λοιμώξεις - τριχομονίαση, ουρεαπλάσμωση, ωχρό τρεπόνεμα, γκαρνερέλωση, γονόρροια, μυκοπλάσμωση, χλαμύδια.
• φυματίωση.

Αντενδείξεις για

Δεδομένου ότι η διαδικασία δεν πραγματοποιείται με τον ασθενή, χωρίς καμία επίδραση στο σώμα, αλλά με βιολογικό υλικό που λαμβάνεται για έρευνα, δεν υπάρχουν αντενδείξεις για PCR λόγω απουσίας δυνητικού κινδύνου.

Ωστόσο, το βιοϋλικό δεν συλλέγεται από τον αυχενικό σωλήνα της μήτρας μετά τη διαδικασία της κολποσκόπησης. Η υποβολή επιχρισμάτων και αποξεσμάτων για ανάλυση επιτρέπεται μόνο 4-6 ημέρες μετά το τέλος της εμμήνου ρύσεως και την πλήρη διακοπή της έκκρισης.

Είναι η μέθοδος ασφαλής;

Δεν είναι δυνατή η αρνητική επίπτωση στον ασθενή κατά τη διάρκεια μιας μεμονωμένης μελέτης του βιοϋλικού του στο εργαστήριο.

Προετοιμασία για τη διαδικασία (υποβολή βιολογικών ουσιών για ανάλυση)

Οποιοδήποτε βιολογικό υγρό, ιστός ή εκκρίσεις σώματος χρησιμεύουν ως δείγμα για ανάλυση PCR, η οποία ανιχνεύει το DNA ενός ξένου παθογόνου. Η ουσία δοκιμής λαμβάνεται με τη μορφή λήψης αίματος από μια φλέβα, απόξεση από τον λάρυγγα, τη ρινική κοιλότητα, την ουρήθρα, την υπεζωκοτική κοιλότητα, τον τράχηλο της μήτρας.

Πριν από τη διαγνωστική διαδικασία, ο γιατρός εξηγεί στον ασθενή τι υλικό θα συλλεχθεί:

1. Κατά την εξέταση για σεξουαλικά μεταδιδόμενες λοιμώξεις, συλλέγονται εκκρίσεις από τα γεννητικά όργανα, ούρα και ένα επίχρισμα από την ουρήθρα.
2. Κατά την ανάλυση για ερπητικές λοιμώξεις, λαμβάνεται για ανάλυση κυτταρομεγαλοϊός, μονοπυρήνωση, ούρα και λάρυγγα· για ηπατίτιδα, τοξοπλάσμωση, λαμβάνεται αίμα από φλέβα.
3. Για διαγνωστικούς σκοπούς διάφοροι τύποιΣυλλέγεται εγκεφαλονωτιαίο υγρό.
4. Στην πνευμονολογία, δείγματα για ανάλυση είναι τα πτύελα και το υπεζωκοτικό υγρό.
5. Κατά τη διεξαγωγή μελέτης πιθανών ενδομήτριων λοιμώξεων κατά τη διάρκεια της εγκυμοσύνης, χρησιμοποιούνται για ανάλυση αμνιακό υγρό και κύτταρα πλακούντα.

Η αξιοπιστία και η ακρίβεια της ανάλυσης εξαρτάται από τη στειρότητα των συνθηκών κατά τη λήψη του υλικού. Δεδομένου ότι η δοκιμή PCR είναι εξαιρετικά ευαίσθητη, οποιαδήποτε μόλυνση της υπό δοκιμή ουσίας μπορεί να αλλοιώσει το αποτέλεσμα.

Η κατάλληλη προετοιμασία για την παράδοση του βιοϋλικού δεν παρουσιάζει δυσκολίες για τους ασθενείς. Υπάρχουν ορισμένες συστάσεις:

• κατά την ανάλυση για σεξουαλικά μεταδιδόμενες λοιμώξεις:
  • αποκλεισμός στενών επαφών 72 ώρες πριν από την υποβολή του υλικού.
  • σταματήστε να χρησιμοποιείτε οποιαδήποτε κολπικά προϊόντα 3 ημέρες πριν.
  • από το βράδυ της προηγούμενης ημέρας, να μην τηρείτε την υγιεινή της περιοχής που εξετάζεται.
  • αποκλείστε την ούρηση 3-4 ώρες πριν τη λήψη δείγματος από την ουρήθρα.
• σταματήστε να παίρνετε αντιβιοτικά ένα μήνα πριν από τη δοκιμή για λοιμώξεις.
• Δίνεται αίμα το πρωί πριν φάτε και πιείτε.
• Το πρώτο πρωινό δείγμα ούρων συλλέγεται σε αποστειρωμένο δοχείο μετά από μια σχολαστική οικεία τουαλέτα.

Διαβάστε παρακάτω για το πώς γίνονται τα διαγνωστικά με τη μέθοδο της αλυσιδωτής αντίδρασης πολυμεράσης.

Πώς λειτουργεί η διαδικασία;

Κατά την εκτέλεση μιας μελέτης PCR, ορισμένοι κύκλοι επαναλαμβάνονται ξανά και ξανά σε έναν αντιδραστήρα (ενισχυτή ή θερμικό κυκλοποιητή):

1. Το πρώτο βήμα είναι η μετουσίωση. Σάλιο, αίμα, υλικό βιοψίας, γυναικολογικά δείγματα, πτύελα, στα οποία υπάρχει υποψία ύπαρξης DNA (ή RNA) ενός παθογόνου, τοποθετούνται σε ενισχυτή, όπου το υλικό θερμαίνεται και το DNA χωρίζεται σε δύο ξεχωριστές αλυσίδες.
2. Το δεύτερο βήμα είναι η ανόπτηση ή ελαφρά ψύξη του υλικούκαι προσθέτοντας σε αυτό εκκινητές που μπορούν να αναγνωρίσουν τις επιθυμητές περιοχές στο μόριο DNA και να συνδεθούν σε αυτές.
3. Το τρίτο βήμα είναι η επιμήκυνση– εμφανίζεται μετά την προσάρτηση 2 εκκινητών σε καθέναν από τους κλώνους DNA. Κατά τη διάρκεια της διαδικασίας, το θραύσμα DNA του παθογόνου ολοκληρώνεται και σχηματίζεται το αντίγραφό του.

Αυτοί οι κύκλοι επαναλαμβάνονται σαν μια «αλυσιδωτή αντίδραση», κάθε φορά που οδηγεί στον διπλασιασμό των αντιγράφων ενός συγκεκριμένου θραύσματος DNA (για παράδειγμα, του τμήματος όπου έχει προγραμματιστεί ένας συγκεκριμένος ιός). Μέσα σε λίγες ώρες, σχηματίζονται πολλά αντίγραφα ενός θραύσματος DNA και ανιχνεύεται η παρουσία τους στο δείγμα. Μετά από αυτό, τα αποτελέσματα αναλύονται και συγκρίνονται με δεδομένα από μια βάση δεδομένων διαφόρων τύπων παθογόνων για να προσδιοριστεί ο τύπος της μόλυνσης.

Διαβάστε παρακάτω σχετικά με την αποκωδικοποίηση των αποτελεσμάτων και τα συμπεράσματα με βάση την αντίδραση PCR.

Αποκωδικοποίηση των αποτελεσμάτων

Το τελικό αποτέλεσμα της μελέτης εκδίδεται 1 – 2 ημέρες μετά την υποβολή του βιολογικού υλικού. Συχνά - ήδη την πρώτη ημέρα μετά την ανάλυση.

Ποιοτική ανάλυση

• ΑρνητικόςΤο αποτέλεσμα σημαίνει ότι δεν βρέθηκαν ίχνη μολυσματικών παραγόντων στην ουσία που υποβλήθηκε για δοκιμή.
• Θετικόςτο αποτέλεσμα σημαίνει την ανίχνευση παθογόνων ιών ή βακτηρίων σε βιολογικό δείγμα με πολύ υψηλό βαθμό ακρίβειας τη στιγμή της υποβολής του υλικού.

Εάν το αποτέλεσμα είναι θετικό, αλλά δεν ανιχνεύονται σημάδια αυξημένης μόλυνσης, αυτή η κατάσταση του σώματος ονομάζεται ασυμπτωματική «υγιή μεταφορά». Συχνότερα παρατηρείται κατά τη λήψη βιοϋλικού από ένα συγκεκριμένο μέρος (τραχηλικό κανάλι, ουρήθρα, στοματική κοιλότητα) σε ιογενείς ασθένειες. Σε αυτή την περίπτωση δεν απαιτείται θεραπεία, αλλά απαιτείται συνεχής ιατρική παρακολούθηση, αφού υπάρχει πιθανότητα:

• εξάπλωση του ιού από φορείς και μόλυνση υγιών ατόμων.
• ενεργοποίηση της διαδικασίας και μετάβαση της νόσου σε χρόνια μορφή.

Ωστόσο, εάν η εξέταση αίματος είναι θετική, αυτό υποδηλώνει ότι η λοίμωξη έχει χτυπήσει το σώμα και αυτό δεν είναι πλέον μια κατάσταση φορέας, αλλά μια παθολογία που απαιτεί άμεση ειδική θεραπεία.

Ποσοτική ανάλυση

Το ποσοτικό αποτέλεσμα καθορίζεται από ειδικό ειδικά για συγκεκριμένο τύπο μόλυνσης. Με βάση αυτό, είναι δυνατό να εκτιμηθεί ο βαθμός ανάπτυξης και το στάδιο της νόσου, γεγονός που καθιστά δυνατή την έγκαιρη συνταγογράφηση της σωστής θεραπείας.

μέσο κόστος

Οι τιμές για την αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης καθορίζονται από: τον τύπο της έρευνας, τη δυσκολία αναγνώρισης του παθογόνου, τη δυσκολία συλλογής βιολογικού υλικού, τον τύπο ανάλυσης (ποιοτική ή ποσοτική) και το επίπεδο τιμής στο εργαστήριο.

Από την άλλη πλευρά, κατά τη μελέτη της PCR, είναι δυνατό να εντοπιστούν πολλά παθογόνα ταυτόχρονα κατά τη συλλογή ενός τύπου υλικού για ανάλυση. Αυτό σας επιτρέπει να εξοικονομήσετε χρήματα σε άλλες εργαστηριακές εξετάσεις.

Κατά προσέγγιση κόστος ανάλυσης PCR σε ρούβλια:

• γονόκοκκος, gardnerella, trichomonas vaginalis – από 180
• chlamydia trachomatis – από το 190
• ιός θηλώματος - από 380 έως 500
• βιοκένωση του ουρογεννητικού συστήματος στις γυναίκες (ποσοτική και ποιοτική εκτίμηση της μικροχλωρίδας) - από 800.

Ακόμη πιο χρήσιμες πληροφορίες σχετικά με τη δοκιμή PCR περιέχονται στο παρακάτω βίντεο:

Η ουσία της διαγνωστικής μεθόδου PCR

Η μέθοδος αλυσιδωτής αντίδρασης πολυμεράσης (PCR) βασίζεται στις αρχές της μοριακής βιολογίας και ανήκει στο πεδίο της γενετικής έρευνας.

Κάθε ζωντανός οργανισμός περιέχει στη δομή του μόρια νουκλεϊκών οξέων - DNA και RNA. Αυτό είναι ένα είδος γενετικού διαβατηρίου που βοηθά να προσδιοριστεί σε ποιο είδος ανήκει ο ένας ή ο άλλος από τους «φορείς» του. Ωστόσο, για να σαρωθεί αυτό το «διαβατήριο», μέχρι πρόσφατα απαιτούνταν ένας ορισμένος ελάχιστος όγκος βιολογικού υλικού. Εάν η συγκέντρωση του DNA ήταν κάτω από το απαιτούμενο επίπεδο, η διαγνωστική ανάλυση δεν ήταν δυνατή.

Όταν διαγνωστεί με PCR, ένα δείγμα βιολογικού υλικού υφίσταται επεξεργασία με ειδικά ένζυμα (πολυμεράσες), τα οποία επιτρέπουν την έναρξη της διαδικασίας πολλαπλών αντιγράφων του υπάρχοντος DNA (RNA). Χρησιμοποιώντας έναν καταρράκτη αλυσιδωτής αντίδρασης, σύμφωνα με την αρχή της γεωμετρικής προόδου, σε λίγες μόνο ώρες είναι δυνατό να ληφθούν αρκετές δεκάδες τρισεκατομμύρια αντίγραφα από ένα μόριο νουκλεϊκού οξέος. Αυτός ο τόμος είναι υπεραρκετός για τη διεξαγωγή συγκριτικών μελετών.

Για ανάλυση, χρησιμοποιείται ένας θερμικός κυκλοποιητής, στον οποίο, υπό αυστηρές συνθήκες θερμοκρασίας, λαμβάνει χώρα η διαδικασία πολλαπλής αντιγραφής DNA. Συνήθως αρκούν 20-30 κύκλοι αναπαραγωγής. Κάθε ένα από αυτά περιλαμβάνει 3 διαδοχικά στάδια:

• μετουσίωση - θέρμανση της μήτρας DNA στους 96°C με την καταστροφή δεσμών υδρογόνου μεταξύ γειτονικών αλυσίδων.
• ανόπτηση - μείωση της θερμοκρασίας κατά 4°C για τη δημιουργία πιρουνιού αναπαραγωγής.
• επιμήκυνση - η εκτόξευση πολυμερασών DNA για τη σύνθεση νέων νουκλεοτιδικών αλυσίδων με βάση τη μητρική.

Κάθε κύκλος τριών σταδίων διαρκεί κατά μέσο όρο 15-20 λεπτά.

Πλεονεκτήματα της διάγνωσης PCR

Η ανάλυση PCR είναι υψηλής τεχνολογίας και απαιτεί επαγγελματισμό από το εργαστηριακό προσωπικό, αλλά για τη σύγχρονη ιατρική έχει γίνει πηγή πρωτοφανών ευκαιριών στον τομέα της ακριβούς διάγνωσης.

Πλεονεκτήματα της PCR:

• ευελιξία (μπορεί να εξεταστεί οποιοδήποτε βιολογικό υλικό - από αιμοσφαίρια, σάλιο και τρίχες έως ύποπτα σημεία στον τόπο του εγκλήματος).
• κατώφλι υψηλής ευαισθησίας (η μέθοδος μπορεί να δώσει αποτελέσματα παρουσία μεμονωμένων κυττάρων ή μεμονωμένων μορίων DNA στο δείγμα).
• multitasking - σε μια προσέγγιση μπορείτε να προσδιορίσετε πολλούς διαφορετικούς τύπους φορέων πληροφοριών ταυτόχρονα (οι βακτηριολογικές μέθοδοι δεν είναι ικανές για αυτό, καθώς απαιτούν διαφορετικά θρεπτικά μέσα για κάθε τύπο μικροοργανισμού).
• την ικανότητα διεξαγωγής ακριβούς ποσοτικής ανάλυσης·
• ταχύτητα επεξεργασίας (σε αντίθεση με άλλους τύπους γενετικής έρευνας, η διάγνωση PCR διαρκεί μόνο 5-7 ώρες).
• ακρίβεια του αποτελέσματος (εάν ακολουθηθεί η τεχνολογία, το σφάλμα πρακτικά εξαλείφεται).
• σχετικά χαμηλό κόστος (η ανάλυση PCR δεν υπερβαίνει τη μέση τιμή των τυπικών δοκιμών).

Όλα αυτά τα πλεονεκτήματα καθιστούν δυνατή τη χρήση αλυσιδωτής αντίδρασης πολυμεράσης για την τακτική παρακολούθηση της διαδικασίας επεξεργασίας.

Δεν ήταν καθόλου τυχαίο που ο δημιουργός της διαγνωστικής μεθόδου PCR έλαβε το βραβείο Νόμπελ για το «εγκεφαλικό του παιδί». Η μέθοδος αλυσιδωτής αντίδρασης πολυμεράσης επιτρέπει:

• Προσδιορίστε το στέλεχος του μολυσματικού παράγοντα με ελάχιστη περιεκτικότητα στο βιοϋλικό (μέχρι μεμονωμένες ιογενείς δομές).
• υπολογίστε την ακριβή συγκέντρωση του παθογόνου σε ολόκληρο το σώμα (για να προσδιορίσετε τη βέλτιστη δόση των φαρμάκων).
• εκτίμηση του βαθμού παθολογικής επίδρασης στον ασθενή και αναγνώριση στελεχών με υψηλή φαρμακολογική αντοχή.
• καθορίζουν τα διαδοχικά στάδια της μόλυνσης και κάνουν περαιτέρω πρόγνωση.

Αυτό είναι ενδιαφέρον! Οι δυνατότητες της ανάλυσης PCR είναι πολύ ευρύτερες από την ποσοτική και ποιοτική εκτίμηση του μολυσματικού υποβάθρου στο ανθρώπινο σώμα. Εκτός από τον εντοπισμό λοιμώξεων, χρησιμοποιείται για τη δημιουργία συγγένειας, τον προσδιορισμό της ταυτότητας, τον εντοπισμό γενετικών παθολογιών και τη σύγκριση βιοϋλικών στην εγκληματολογία.

Ποιες λοιμώξεις μπορεί να ανιχνεύσει τα διαγνωστικά PCR;

Η ανάλυση PCR είναι ικανή υψηλή ακρίβειαυπολογίστε κάθε μολυσματικό φορέα που περιλαμβάνεται στον σύγχρονο ιατρικό κατάλογο ασθενειών:

• παθογόνα ηπατίτιδας όλων των τύπων (Η PCR σάς επιτρέπει να προσδιορίσετε την πηγή μόλυνσης στο στάδιο της περιόδου επώασης και να ξεκινήσετε τη θεραπεία πολύ πριν εμφανιστούν τα συμπτώματα της νόσου).
• παθογόνα HIV και ΣΜΝ (ουρεόπλασμα, μυκόπλασμα, χλαμύδια, τριχομονάδες).
• ομάδα λοιμώξεων TORCH (σχετική κατά την εξέταση εγκύων γυναικών για έγκαιρη ανίχνευση εμβρυϊκών παθολογιών).
• φυματίωση (λανθάνουσα μορφή της νόσου).
• καντιντίαση (λανθάνουσα μορφή);
• λοίμωξη από εντεροϊό?
• μονοπυρήνωση;
• λιστερίωση;
• σαλμονέλωση (προσδιορισμός συγκεκριμένου στελέχους).
• ιός θηλώματος;
• Gardnerellosis;
• ιός εγκεφαλίτιδα που μεταδίδεται από κρότωνες.

Ιδιαίτερα δημοφιλής είναι η ανάλυση για ενδοκυτταρικές λοιμώξεις (για παράδειγμα, χλαμύδια), ο προσδιορισμός των οποίων με τον συνήθη τρόπο είναι δύσκολος ακόμη και με υψηλή συγκέντρωση αυτών των μικροοργανισμών στους ιστούς του ασθενούς.

Λαμβάνοντας υπόψη τον χαρακτήρα πολλαπλών εργασιών της μεθόδου, είναι δυνατό να πραγματοποιηθεί ταυτόχρονη ανάλυση PCR για 12 υποκείμενες λοιμώξεις. Μια ολοκληρωμένη προσέγγιση είναι μια βολική επιλογή για τον έλεγχο ρουτίνας του σώματος για σεξουαλικά μεταδιδόμενες λοιμώξεις με ελάχιστο κίνδυνο λανθασμένης διάγνωσης.

Σε μια σημείωση! Με τη βοήθεια των διαγνωστικών PCR, γίνεται μια πρόβλεψη για τις λεγόμενες «αδρανείς» μορφές λοιμώξεων που βρίσκονται στο σώμα χωρίς να εκδηλώνονται συμπτώματα της νόσου (ιδιαίτερα σημαντική για τη θεραπεία γυναικολογικών και ουρολογικών παθήσεων, φυματίωσης, κρότωνες εγκεφαλίτιδα, ιός θηλώματος).

Ποια βιολογικά υλικά μελετώνται;

Δεν υπάρχουν καθορισμένοι κανόνες ή όρια. Η ευελιξία της μεθόδου σάς επιτρέπει να χρησιμοποιείτε οποιοδήποτε βιολογικό υλικό για ανάλυση:

• κολπικό επίχρισμα, απόξεση από την ουρήθρα και τον αυχενικό σωλήνα (για τη διάγνωση των ΣΜΝ).
• ούρα (φυματίωση, ορισμένα ΣΜΝ, κυτταρομεγαλοϊός).
• αίμα (HIV, ηπατίτιδα, λοιμώξεις TORCH).
• μπατονέτα λαιμού (μονοπυρήνωση, κυτταρομεγαλοϊός).
• εγκεφαλονωτιαίο υγρό (νευρολοιμώξεις)
• αμνιακό υγρό και ιστός πλακούντα (ανάλυση για μολύνσεις TORCH για την πρόληψη παθολογιών της εμβρυϊκής ανάπτυξης).
• υπεζωκοτικό υγρό (πνευμονικές λοιμώξεις).

Για άλλους τύπους διαγνωστικών PCR (δημιουργία σχέσεων, σύγκριση βιοϋλικών), χρησιμοποιείται σάλιο, μαλλιά, νύχια, επιθηλιακά κύτταρα και άλλες πηγές γενετικών πληροφοριών.

Σε μια σημείωση! Χρησιμοποιώντας τη διαγνωστική μέθοδο PCR, τα παθογόνα ανιχνεύονται όχι μόνο σε ζωντανούς ιστούς, αλλά και σε δείγματα εδάφους, νερού και φυτικών υποστρωμάτων. αξιολόγηση της παθογόνου δραστηριότητας των μικροοργανισμών τόσο στο ανθρώπινο σώμα όσο και στο περιβάλλον του (η παρουσία μιας αναγνωρισμένης πηγής της νόσου θα επιτρέψει τη λήψη κατάλληλων μέτρων για την πρόληψη της στο μέλλον).

Πώς να προετοιμαστείτε για τη δοκιμή

Οι ασθενείς της κλινικής μας δεν χρειάζεται να αναρωτιούνται πού να κάνουν εξετάσεις για PCR. Παρέχουμε όλες τις προϋποθέσεις για αποστειρωμένη συλλογή υλικού και αποστολή του στο εργαστήριο.

Δεν απαιτείται ειδική εκπαίδευση, αλλά η λίστα γενικές συστάσειςκαλό είναι να συμμορφωθείτε. Για λίγες μέρες, σταματήστε το αλκοόλ, περιορίστε το κάπνισμα, εάν είναι δυνατόν, εξαλείψτε φάρμακα, προσπαθήστε να αποφύγετε αγχωτικές καταστάσεις και έντονη σωματική δραστηριότητα.

Διαφορετικά, η προετοιμασία για την ανάλυση εξαρτάται από τον τύπο του βιοϋλικού:

• πριν πάρετε ένα επίχρισμα ή απόξεση για λοιμώξεις του ουρογεννητικού συστήματος, απέχετε από τη σεξουαλική επαφή για 2-3 ημέρες (οι γυναίκες πρέπει να βεβαιωθούν ότι η ημέρα της εξέτασης δεν πέφτει στην περίοδό τους).
• πριν κάνετε μια εξέταση αίματος για PCR, αποφύγετε να φάτε το πρωί (η εξέταση λαμβάνεται με άδειο στομάχι) και πιείτε ένα ποτήρι καθαρό νερό.
• Πριν δωρίσετε ούρα, αποφύγετε την κατανάλωση τροφών που επηρεάζουν την οξύτητα των ούρων (φρούτα, κρέας, όσπρια, χόρτα).

Σπουδαίος! Η πιο σημαντική απαίτηση στη διάγνωση λοιμώξεων με PCR είναι η καθαρότητα του βιοϋλικού. Επομένως, προσπαθήστε να καταβάλετε κάθε δυνατή προσπάθεια για να αποτρέψετε τη μόλυνση των ιστών με ξένο DNA (προσέξτε τη στειρότητα του δοχείου αποστολής, την προσωπική υγιεινή και τη διαθεσιμότητα καθαρών ρούχων).

Επεξήγηση της ανάλυσης PCR

Τα αποτελέσματα μιας ποιοτικής ανάλυσης PCR για λοιμώξεις παρουσιάζονται με τη μορφή πίνακα, όπου μπροστά από κάθε μολυσματικό παράγοντα υπάρχει το αντίστοιχο σημάδι:

• αρνητικό αποτέλεσμα (δεν υπάρχει παθογόνο αυτού του τύπου).
• θετικό αποτέλεσμα (ανιχνεύθηκε παθογόνο).

Η απουσία συμπτωμάτων της νόσου μπορεί να μην αντιστοιχεί στην πραγματική εικόνα, επομένως τα αποτελέσματα των εξετάσεων θα είναι απροσδόκητα για ορισμένους. Δεν χρειάζεται να ανησυχείτε: η αναγνώριση του μολυσματικού παράγοντα στα αρχικά στάδια είναι το κλειδί για μια επιτυχημένη και γρήγορη θεραπεία.

Κατά τη διεξαγωγή μιας ποσοτικής ανάλυσης PCR, μπορείτε να υπολογίσετε τον βαθμό ιικού φορτίου (να μάθετε τον αριθμό των αντιγράφων του ιού ανά μονάδα όγκου). Χάρη σε αυτό το είδος μελέτης, είναι δυνατό να προσδιοριστεί η ένταση της μολυσματικής διαδικασίας, καθώς και να αξιολογηθεί η αποτελεσματικότητα της θεραπείας.

Ανάλυση PCR: τιμή και όροι

Ο μέσος διαγνωστικός χρόνος είναι 5-10 ώρες. Τα αποτελέσματα σε μορφή πίνακα εκδίδονται την αμέσως επόμενη εργάσιμη ημέρα μετά τη συλλογή του βιοϋλικού.

Όταν επιλέγετε μια ανάλυση PCR, η τιμή δεν είναι βασικό ζήτημα. Κατά μέσο όρο, το κόστος δεν υπερβαίνει τις συμβατικές βιοχημικές εξετάσεις και, σε αντίθεση με το μεγαλύτερο μέρος των γενετικών μελετών, είναι διαθέσιμο σε όλους τους ασθενείς.

Η αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης (PCR) είναι μια μέθοδος υψηλής ακρίβειας μοριακής γενετικής διάγνωσης που σας επιτρέπει να εντοπίσετε διάφορες μολυσματικές και κληρονομικές ασθένειες στον άνθρωπο, τόσο στο οξύ όσο και στο χρόνιο στάδιο και πολύ πριν εκδηλωθεί η ασθένεια.

Η αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης (PCR) αναπτύχθηκε από τον Kary Mullis (ΗΠΑ) το 1983, για την οποία τιμήθηκε με το Νόμπελ Χημείας το 1993.

Η ανάλυση PCR έχει γίνει ένα είδος «χρυσού προτύπου» για τις περισσότερες λοιμώξεις. Οι περισσότεροι ειδικοί το αντιμετωπίζουν σχεδόν καθημερινά και δεν μπορούν να φανταστούν να κάνουν τελική διάγνωση χωρίς αυτό. Η PCR γίνεται συχνά η μόνη αντίδραση για τον εντοπισμό των ενεργών σταδίων της νόσου σε περιόδους που άλλες βακτηριολογικές, ιολογικές και ανοσολογικές διαγνωστικές μέθοδοι δεν λειτουργούν.

Πλεονεκτήματα της διάγνωσης PCR στη σύγχρονη ιατρική:

Άμεση ανίχνευση της παρουσίας ενός παθογόνου (δηλαδή μιας συγκεκριμένης περιοχής DNA ή RNA του παθογόνου) στο δείγμα δοκιμής.
Η υψηλή ειδικότητα σάς επιτρέπει να προσδιορίσετε ένα μοναδικό τμήμα DNA ή RNA χαρακτηριστικό ενός συγκεκριμένου παθογόνου, το οποίο εξαλείφει την πιθανότητα ψευδών αντιδράσεων.
Η υψηλή ευαισθησία της μεθόδου PCR σας επιτρέπει να ανιχνεύσετε ακόμη και μεμονωμένα κύτταρα παθογόνων (ιούς, βακτήρια). Η ευαισθησία της ανάλυσης PCR είναι 10-1000 κύτταρα στο δείγμα δοκιμής (για παράδειγμα, η ευαισθησία των ανοσολογικών και μικροσκοπικών δοκιμών είναι μόνο 103-105 κύτταρα).
Ανάπτυξη μιας καθολικής τεχνικής PCR για την ανίχνευση διαφόρων παθογόνων. Αντικείμενο για έρευνα με τη μέθοδο PCR είναι το γενετικό υλικό (DNA, RNA) του παθογόνου. Η τεχνική σάς επιτρέπει να αναγνωρίσετε πολλά παθογόνα από ένα βιολογικό δείγμα.
Λάβετε τα αποτελέσματα της ανάλυσης αρκετά γρήγορα. Μια πλήρης εξέταση πραγματοποιείται σε 4-4,5 ώρες, λιγότερο συχνά - λίγο περισσότερο.
Δυνατότητα ανίχνευσης παθογόνων παραγόντων πριν από την έναρξη των συμπτωμάτων της νόσου (προκλινική διάγνωση) και μετά προηγούμενη ασθένεια(αναδρομική διάγνωση). Ένα παράδειγμα προκλινικής διάγνωσης θα ήταν η εξέταση κατά την περίοδο επώασης (από τη στιγμή της μόλυνσης μέχρι να παραπονεθεί ο ασθενής), καθώς και η λανθάνουσα μόλυνση (όταν δεν υπάρχουν καθόλου συμπτώματα, αλλά μόνο εργαστηριακά δεδομένα - PCR, για παράδειγμα). Μία από τις σημαντικές πτυχές της διάγνωσης PCR είναι η πραγματοποίηση PCR σε αρχειακό υλικό ή βιολογικά κατάλοιπα, η οποία είναι σημαντική για την αναγνώριση της προσωπικότητας ή της πατρότητας.

Επί του παρόντος, η διαγνωστική PCR βρίσκεται υπό σημαντική εξέλιξη. Η ίδια η μέθοδος βελτιώνεται, νέες ποικιλίες PCR εμφανίζονται ξανά και ξανά και νέα συστήματα δοκιμών για αυτήν την αντίδραση εισέρχονται στην ιατρική αγορά. Χάρη σε αυτό, το κόστος των μελετών PCR γίνεται πιο προσιτό για ένα ευρύ φάσμα ασθενών κάθε χρόνο.

Σε τι βασίζεται η μέθοδος PCR;

Η βάση της αλυσιδωτής αντίδρασης πολυμεράσης είναι ο επαναλαμβανόμενος διπλασιασμός (ενίσχυση) ενός συγκεκριμένου τμήματος DNA ή RNA χρησιμοποιώντας ένζυμα στο εργαστήριο. Ως αποτέλεσμα, σχηματίζεται η επαρκής ποσότητα DNA ή RNA για οπτική ανάλυση. Κατά τη διάρκεια της μελέτης, αντιγράφεται μόνο η περιοχή που ταιριάζει στις καθορισμένες συνθήκες και μόνο εάν υπάρχει στο δείγμα δοκιμής.

Για παράδειγμα, υλικό για έρευνα στο οποίο υποτίθεται ότι υπάρχουν θραύσματα DNA ή RNA ενός παθογόνου (σάλιο, αίμα, ούρα, εκκρίσεις από τα γεννητικά όργανα) τοποθετείται σε ειδικό αντιδραστήρα (ενισχυτή). Στη συνέχεια, προστίθενται σε αυτό συγκεκριμένα ένζυμα, τα οποία συνδέονται με το DNA ή το RNA του παθογόνου και συντίθεται το αντίγραφό του. Αυτή η αντιγραφή συμβαίνει σε διάφορα στάδια, όπως μια «αλυσιδωτή αντίδραση», και τελικά εκατοντάδες και χιλιάδες αντίγραφα μπορούν να δημιουργηθούν από ένα αντίγραφο γενετικού υλικού. Στη συνέχεια ακολουθεί η ανάλυση και σύγκριση του αποτελέσματος με την υπάρχουσα βάση δεδομένων για τη δομή των διαφόρων παθογόνων. Χρησιμοποιώντας PCR, μπορείτε όχι μόνο να προσδιορίσετε τον τύπο του παθογόνου, αλλά και να δώσετε ένα ποσοτικό αποτέλεσμα της ανάλυσης, δηλαδή πόσα παθογόνα υπάρχουν στο ανθρώπινο σώμα.

Η μέθοδος PCR επεκτείνει επί του παρόντος το φάσμα των ερευνητικών δυνατοτήτων: εισάγει μεταλλάξεις, μάτισμα θραυσμάτων DNA και έχει γίνει ευρέως διαδεδομένη στην ιατρική, για παράδειγμα, για την καθιέρωση της πατρότητας, την εμφάνιση νέων γονιδίων κ.λπ.

Ποιες λοιμώξεις μπορούν να ανιχνευθούν χρησιμοποιώντας διαγνωστικά PCR;

1) Λοίμωξη HIV (ο ιός της ανθρώπινης ανοσοανεπάρκειας HIV-1 μπορεί να ανιχνευθεί)
2) Ιογενής ηπατίτιδα A, B, C, G (RNA-HAV, DNA-HBV, RNA-HCV, RNA-HGV)
3) Λοιμώδης μονοπυρήνωση (DNA του ιού Epstein-Barr - EBV)
4) Λοίμωξη από κυτταρομεγαλοϊό (DNA-CMV)
5) Λοίμωξη από έρπητα (DNA ιός απλού έρπητα τύπους 1 και 2 HSV)
6) ΣΜΝ (σεξουαλικά μεταδιδόμενες λοιμώξεις) – ουρεαπλάσμωση, γαρδνερέλλωση, χλαμύδια, μυκοπλάσμωση, τριχομονίαση,
7) Φυματίωση (Mycobacterium tuberculosis)
8) Ογκογόνοι ιοί - λοίμωξη από ιό θηλώματος (ιός των ανθρώπινων θηλωμάτων (συμπεριλαμβανομένων των ογκογόνων τύπων του 16, 18, 31, 33, 45, 51, 52, 56, 58 και 59)
9) Βορελίωση, εγκεφαλίτιδα που μεταδίδεται από κρότωνες
10) Λιστερίωση
11) Καντιντίαση (μύκητες του γένους Candida)
12) Λοίμωξη από ελικοβακτηρίδιο του πυλωρού
και άλλοι

Λαμβάνοντας υπόψη το εύρος των παθογόνων, η διαγνωστική PCR χρησιμοποιείται ενεργά στη γυναικολογική, ουρολογική πρακτική, πρακτική μολυσματικών ασθενειών, πνευμονολογία, φθισιολογία, γαστρεντερολογία, αιματολογία, ογκολογία και άλλες.

Υλικό για έρευνα και κανόνες συλλογής του

Το υλικό για την έρευνα PCR, στην οποία μπορεί να ανιχνευθεί ξένο βακτηριακό DNA ή ιικό DNA ή RNA, μπορεί να είναι διάφορα βιολογικά μέσα και ανθρώπινα υγρά: βλέννα, ούρα, αίμα, πτύελα, ξύσεις επιθηλιακών κυττάρων, ιστός πλακούντα, αίμα, χυμός προστάτη. αμνιακό υγρό, υπεζωκοτικό υγρό.

Κατά τον έλεγχο για σεξουαλικά μεταδιδόμενες λοιμώξεις (ΣΜΝ), άνδρες και γυναίκες ελέγχονται για εκκρίσεις γεννητικών οργάνων, επίχρισμα ή απόξεση από τον τράχηλο, επίχρισμα ή απόξεση από την ουρήθρα (ουρήθρα) και ούρα.

Κατά την εξέταση για λοιμώξεις (ερπητικές λοιμώξεις, CMV, μονοπυρήνωση, τοξοπλάσμωση, ηπατίτιδα Β, C, λοίμωξη HIV), λαμβάνεται αίμα για PCR.

Για τη διάγνωση της λοιμώδους μονοπυρήνωσης, του CMV ή της ερπητικής λοίμωξης, λαμβάνεται ένα στυλεό από το λαιμό και λαμβάνονται ούρα για εξέταση για CMV. Συχνά για εξέταση για βλάβη νευρικό σύστημαΣε διάφορες μελέτες, λαμβάνεται εγκεφαλονωτιαίο υγρό.

Στην πνευμονολογία το υλικό που χρησιμοποιείται είναι τα πτύελα και το υπεζωκοτικό υγρό.

Κατά την εξέταση για ενδομήτριες λοιμώξεις - αμνιακό υγρό, ιστός πλακούντα.

Προετοιμασία για παράδοση υλικού και διαγνωστικά PCR

Σχεδόν όλοι οι ασθενείς που υποβάλλονται σε διαγνωστική PCR έχουν το δικαίωμα να βασίζονται σε ένα αξιόπιστο, ακριβές και γρήγορο αποτέλεσμα, το οποίο εξαρτάται σε μεγάλο βαθμό από τις δυνατότητες του εργαστηρίου και τον επαγγελματισμό του ιατρού του εργαστηρίου. Ταυτόχρονα, πολλοί δεν πιστεύουν ότι αυτή η ίδια η αξιοπιστία εξαρτάται σε μεγάλο βαθμό από εμάς τους ίδιους, δηλαδή από τις συστάσεις του θεράποντος ιατρού, τον τρόπο ζωής και την ορθότητα της συλλογής του υλικού. Κατά τη συλλογή υλικού, απαιτούνται συνθήκες που αποκλείουν τη μόλυνση (μόλυνση) του υλικού και, κατά συνέπεια, θέτουν αμφιβολίες για την αντικειμενικότητα της ανάλυσης.

Η σωστή προετοιμασία για την υποβολή του υλικού δεν είναι ιδιαίτερα δύσκολη. Υπάρχουν οι ακόλουθες συστάσεις από τους γιατρούς για τους ασθενείς:

1) να μην είστε σεξουαλικά ενεργοί μία ημέρα πριν από την υποβολή του υλικού.
2) Δίνεται αίμα για εξέταση το πρωί με άδειο στομάχι (μην τρώτε ή πίνετε).
3) κατά τη δωρεά ούρων, η πρώτη πρωινή δόση συλλέγεται σε ένα καθαρό, αποστειρωμένο δοχείο.

Χρόνος ετοιμότητας για ανάλυση PCR

Το τελικό αποτέλεσμα είναι έτοιμο 1,5-2 ημέρες μετά την υποβολή του υλικού. Σε ορισμένες περιπτώσεις, το αποτέλεσμα είναι έτοιμο την πρώτη μέρα.

Ερμηνεία των αποτελεσμάτων PCR

ΑρνητικόςΤο αποτέλεσμα της PCR δείχνει ότι δεν βρέθηκαν ίχνη μολυσματικών παραγόντων στο υλικό δοκιμής τη στιγμή της παράδοσης. Οι περισσότερες περιπτώσεις δείχνουν την απουσία της λοίμωξης που επιχειρήθηκε να βρεθεί στο δείγμα δοκιμής.

Θετικόςτο αποτέλεσμα της PCR υποδεικνύει την ανίχνευση ιχνών μόλυνσης στο βιολογικό δείγμα που ελέγχεται. Με μεγάλη ακρίβεια, ένα θετικό αποτέλεσμα υποδηλώνει την παρουσία μόλυνσης σε αυτή τη στιγμήχρόνος.

Υπάρχουν περιπτώσεις όπου η PCR αποδεικνύεται θετική, αλλά δεν μπορούμε να μιλήσουμε για ενεργή λοίμωξη - αυτός είναι ο λεγόμενος "υγιής φορέας" χωρίς κλινικά συμπτώματα της νόσου, που δεν απαιτεί θεραπεία, αλλά απαιτεί δυναμική παρακολούθηση από γιατρό . Παρατηρείται συχνότερα με πλήθος ιογενών λοιμώξεων (HPV, CMV λοίμωξη, EBV λοίμωξη, ερπητική λοίμωξη και άλλες) σε υλικά όπως σάλιο, ξύσεις του τραχηλικού πόρου, ουρήθρα, δηλαδή από τοπική εστία. Ωστόσο, δεν πρέπει να ξεχνάμε ότι είναι δυνατή η μετάδοση της λοίμωξης από φορείς σε υγιή άτομα, όπως και η μετάβαση σε χρόνια μορφή της νόσου με ενεργοποίηση της διαδικασίας. Εάν η PCR είναι θετική στο αίμα, τότε αυτό δεν είναι πλέον φορέας και απαιτεί ειδική θεραπεία.

Το ποσοτικό αποτέλεσμα της PCR αξιολογείται μόνο από γιατρό ξεχωριστά για μια συγκεκριμένη λοίμωξη ξεχωριστά και δεν έχει γενικές διαβαθμίσεις. Με βάση το ποσοτικό αποτέλεσμα PCR, ο γιατρός μπορεί να καθορίσει τον βαθμό της δραστηριότητας της μόλυνσης και να ορίσει το στάδιο της νόσου, το οποίο σίγουρα θα επηρεάσει την πορεία και τις δόσεις των συνταγογραφούμενων φαρμάκων.

Ένα από τα τελευταία συναρπαστικά ερωτήματα: πόσο ακριβή είναι τα διαγνωστικά PCR;

Υπάρχουν 3 ορισμοί για την ανάλυση PCR:

1. Ακρίβεια (με μεγάλο βαθμό πιθανότητας είναι δυνατό να εντοπιστεί ή να αποφευχθεί μόλυνση).
2. Ειδικότητα (ακρίβεια ανίχνευσης συγκεκριμένης μόλυνσης).
3. Ευαισθησία (ακόμα και με χαμηλή περιεκτικότητα σε γενετικό υλικό παθογόνων στο δείγμα δοκιμής, η μόλυνση θα ανιχνευθεί).

Η αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης πρακτικά δεν παράγει ψευδώς θετικά αποτελέσματα (δηλαδή, δεν υπάρχουν θετικά δείγματα όπου δεν υπάρχει μόλυνση). Τα ψευδώς αρνητικά αποτελέσματα είναι σπάνια (τις περισσότερες φορές λόγω της απουσίας ενεργού λοίμωξης στο άτομο αυτή τη στιγμή). Για παράδειγμα, λανθάνουσα μόλυνση, χρόνια λοίμωξη χωρίς δραστηριότητα.

Λοιμωξιολόγος N.I. Bykova

Βίντεο σχετικά με το γιατί και πώς να κάνετε μια εξέταση PCR για λοιμώξεις

Η ανάλυση PCR, δεν γνωρίζουν πολλοί άνθρωποι τι είναι, αν και σήμερα είναι μια από τις καινοτόμες μεθόδους για τη διάγνωση μολυσματικών ασθενειών, για τις οποίες ο προγραμματιστής της έλαβε το βραβείο Νόμπελ το 1993. Αυτή η μέθοδος υψηλής τεχνολογίας σας επιτρέπει να ανιχνεύσετε σοβαρές ασθένειεςστο αρχικό στάδιο και να ξεκινήσουν έγκαιρα τη θεραπεία τους.

Η ανάλυση βασίζεται στις αρχές της μοριακής βιολογίας. Η έρευνα PCR περιλαμβάνει τη χρήση ενός ειδικού ενζύμου που, υπό την επίδραση συνθήκες θερμοκρασίας, αντιγράφει το RNA και το DNA των βακτηρίων και των ιών που υπάρχουν στο συλλεγμένο βιοϋλικό. Μια τέτοια μαζική αναπαραγωγή επιτρέπει στον γιατρό να προσδιορίσει ακριβώς σε ποιο είδος ανήκει το βακτήριο που προκάλεσε την ασθένεια, καθώς και να μετρήσει το επίπεδο της συγκέντρωσής του στο βιοϋλικό. Η διαδικασία αντιγραφής πραγματοποιείται σε μια ειδική συσκευή - έναν θερμικό κυκλοποιητή, ο οποίος θερμαίνει και ψύχει τους δοκιμαστικούς σωλήνες με το συλλεγμένο υλικό, δημιουργώντας κατάλληλες συνθήκες για αναπαραγωγή.

Η δοκιμή PCR πραγματοποιείται για πολλούς λόγους, αλλά τις περισσότερες φορές χρησιμοποιείται για τον προσδιορισμό της παρουσίας μολυσματικών ασθενειών όπως:

• έρπης;
• σεξουαλικά μεταδιδόμενες λοιμώξεις - χλαμύδια, ουρεαπλάσμωση, γαρδνερέλλωση, τριχομονάση.
• καντιντίαση;
• ηπατίτιδα;
• μονοπυρήνωση;
• λιστερίωση;
• κυτταρομεγαλοϊός;
• φυματίωση;
• ιός των ανθρωπίνων θηλωμάτων;
• εγκεφαλίτιδα που μεταδίδεται από κρότωνες.

Η ανάλυση PCR δεν περιορίζεται στην εφαρμογή της στην ιατρική· ο έλεγχος γίνεται συχνά εάν είναι απαραίτητο να κατανοηθεί σε ποιον ανήκει το βιολογικό υλικό που βρέθηκε στον τόπο του εγκλήματος, δηλαδή, η ανάλυση PCR χρησιμοποιείται ευρέως στην εγκληματολογική επιστήμη. Θα πρέπει να σημειωθεί ότι λαμβάνεται επίχρισμα ή αίμα για PCR εάν πρέπει να διαπιστωθεί η πατρότητα. Τα αποτελέσματα των διαγνωστικών PCR δεν είναι σε καμία περίπτωση κατώτερα από τη συνηθισμένη ανάλυση συγγένειας DNA και είναι πολύ φθηνότερα.

Διαγνωστικά χαρακτηριστικά

Η ανάλυση PCR έχει έναν τεράστιο αριθμό θετικών πτυχών. Πρώτα απ 'όλα, είναι σημαντικό να σημειωθεί η ευαισθησία του τεστ. Ο αναλυτής PCR είναι σε θέση να ανιχνεύσει βακτηριακά μόρια DNA ακόμη και σε μικρές ποσότητες, δηλαδή ο γιατρός λαμβάνει πληροφορίες σχετικά με πρώιμο στάδιοασθένεια ή την εμφάνιση μιας χρόνιας μορφής της νόσου. Η εξέταση αίματος PCR μπορεί να προσδιορίσει ακόμη και την παρουσία μιας λοιμώδους νόσου, η οποία είναι σε λανθάνουσα μορφή και δεν εμφανίζεται με κανέναν τρόπο.

Θα πρέπει να σημειωθεί ότι η ανάλυση PCR σε άνδρες και γυναίκες μπορεί να πραγματοποιηθεί παρουσία οποιουδήποτε τύπου υλικού, δεν χρειάζεται να είναι αίμα ή επίχρισμα, σάλιο, κύτταρα δέρματος και ακόμη και ούρα.

Τα αποτελέσματα των δοκιμών PCR μπορεί να είναι εκτεταμένα, καθώς η διάγνωση λοιμώξεων με PCR μπορεί να συλλάβει αμέσως πολλά παθογόνα που βρίσκονται σε ένα δείγμα βιοϋλικού. Η εξέταση μπορεί να ολοκληρωθεί σε οποιαδήποτε κατάλληλη στιγμή, την οποία η ανάλυση δείχνει ότι ένα άτομο μπορεί να ανακαλύψει σε σύντομο χρονικό διάστημα, καθώς τα διαγνωστικά αποτελέσματα του βιοϋλικού είναι έτοιμα εντός 5 ωρών.

Όλοι οι γιατροί συμφωνούν ότι μια εξέταση αίματος για PCR ή άλλο υλικό δεν δίνει ποτέ ψευδή αποτελέσματα εάν ακολουθηθεί σωστά η διαγνωστική μεθοδολογία. PCR θετική ή PCR αρνητική μπορεί να είναι ψευδής μόνο εάν το προσωπικό του εργαστηρίου δεν έχει υψηλό επίπεδο επαγγελματισμού. Εάν το κατασχεθέν βιοϋλικό ήταν μολυσμένο ή αποθηκεύτηκε λανθασμένα, τότε η ερμηνεία της ανάλυσης PCR μπορεί να έχει παραμορφωμένα αποτελέσματα.

Προετοιμασία για διαγνωστικά

Ένα επίχρισμα PCR λαμβάνεται από τον τράχηλο των γυναικών εάν είναι απαραίτητο να προσδιοριστούν σεξουαλικά μεταδιδόμενα νοσήματα, για παράδειγμα, χλαμύδια, ουρεόπλασμα ή έρπης. Εάν απαιτείται εξέταση PCR για αυτά τα βακτήρια σε έναν άνδρα, τότε λαμβάνεται μια έκκριση από την ουρήθρα - χυμός προστάτη, με άλλα λόγια. Το αίμα ελέγχεται με τη μέθοδο PCR εάν θέλουν να προσδιορίσουν ηπατίτιδα, τοξοπλάσμωση και HIV. Πραγματοποιείται εξέταση PCR για μονοπυρήνωση και κυτταρομεγαλοϊό αφαιρώντας ένα στυλεό από το λαιμό. Η αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης για την παρουσία πνευμονικών λοιμώξεων πραγματοποιείται με την παρουσία βιοϋλικού όπως πτύελα ή υπεζωκοτικό υγρό.

Η PCR γίνεται κατά τη διάρκεια της εγκυμοσύνης εάν υπάρχει υποψία για ενδομήτριες λοιμώξεις, καθώς και για ασθένειες και παθολογίες του νευρικού συστήματος του εμβρύου. Ο πλακούντας ιστός λαμβάνεται από την έγκυο ως βιοϋλικό για έρευνα. Εάν ένα άτομο έχει βλάβη στο νευρικό σύστημα, εξετάζεται το εγκεφαλονωτιαίο υγρό. Για τον εντοπισμό βακτηρίων όπως το ελικοβακτηρίδιο του πυλωρού, χρησιμοποιούνται βιοψίες του στομάχου και του δωδεκαδακτύλου.

Η εξέταση ούρων PCR χρησιμοποιείται επίσης συχνά, αλλά είναι λιγότερο προτιμότερη από μια εξέταση αίματος. Σας επιτρέπει να δείτε την παρουσία παθογόνων μικροοργανισμών που προκαλούν μολυσματικές ασθένειες, αλλά δεν μπορούν να υποδείξουν τον ακριβή αριθμό τους και τον βαθμό ανάπτυξης της νόσου. Η PCR ούρων χρησιμοποιείται εάν για κάποιο λόγο δεν είναι δυνατή η αφαίρεση αίματος ή η δημιουργία επιχρίσματος. Θα πρέπει επίσης να σημειωθεί ότι η PCR ούρων μπορεί να χρησιμοποιηθεί για τη μελέτη λοιμώξεων σε μικρά παιδιά. Μια εξέταση ούρων μπορεί επίσης να καθορίσει την παρουσία λοίμωξης και φλεγμονής στο Κύστη, εντοπίστε πέτρες, άμμο, καθώς και κυστίτιδα και ουρηθρίτιδα.

Όπως αναφέρθηκε παραπάνω, μπορείτε να κάνετε μια εξέταση PCR εάν έχετε κάποιο βιοϋλικό. Ανάλυση PCR, ξέρετε τι είναι, πρέπει επίσης να γνωρίζετε πώς να προετοιμαστείτε για τη διάγνωση. Η προετοιμασία εξαρτάται άμεσα από το τι πρόκειται να αφαιρεθεί· για παράδειγμα, πρέπει να δωρίσετε ούρα μετά από προσεκτική υγιεινή των γεννητικών οργάνων το πρωί. Το αίμα δίνεται με άδειο στομάχι· κατά τη διάρκεια της αιμοδοσίας, ή μάλλον, την προηγούμενη ημέρα, πρέπει να σταματήσετε να παίρνετε οποιαδήποτε φάρμακα. Εάν υπάρχουν χρόνιες ασθένειες, τότε ο κατάλογος των εγκεκριμένων φαρμάκων για χρήση αποφασίζεται μεμονωμένα από τον θεράποντα ιατρό.

Η ανάλυση κοπράνων πραγματοποιείται το πρωί μετά από προσεκτική προετοιμασία. Την παραμονή της εξέτασης, είναι απαραίτητο να αποφεύγονται οι βαριές τροφές και να γίνεται ενδελεχής υγιεινή των γεννητικών οργάνων. Η ανάλυση κοπράνων θα είναι αναξιόπιστη εάν το βιοϋλικό αφαιρέθηκε με χρήση κλύσματος· είναι απαραίτητη η φυσική κάθοδος του υλικού. Δεν απαιτείται προετοιμασία για τη δωρεά σάλιου, αρκεί να σταματήσετε το κάπνισμα ή να πίνετε χυμό εσπεριδοειδών.

Πριν από την υποβολή βιοϋλικού για τον προσδιορισμό των ασθενειών που μεταδίδονται μέσω του σεξ, οι ασθενείς πρέπει να αποκλείουν τη σεξουαλική επαφή δύο ημέρες πριν από τη διάγνωση PCR. Απαγορεύεται στις γυναίκες να κάνουν επίχρισμα τραχήλου της μήτρας κατά την έμμηνο ρύση δύο ημέρες μετά την έμμηνο ρύση, διαφορετικά η ερμηνεία της PCR θα έχει παραμορφωμένες πληροφορίες.

Αποτελέσματα διαλογής

Μόνο ένας εξειδικευμένος γιατρός μπορεί να εξηγήσει λεπτομερώς τι λέει μια ανάλυση PCR για την κατάσταση ενός συγκεκριμένου ασθενούς· δεν θα είναι εύκολο να κατανοηθούν ανεξάρτητα τα δεδομένα που αναφέρονται στη φόρμα. Εάν ζητήσετε από τον γιατρό να αποκρυπτογραφήσει τα δεδομένα, θα πει πρώτα από όλα εάν το αποτέλεσμα είναι θετικό ή αρνητικό. Εάν η ανάλυση είναι αρνητική, σημαίνει ότι το άτομο είναι υγιές και ότι δεν βρέθηκαν βακτήρια στο υλικό δοκιμής. Σε περίπτωση θετικού αποτελέσματος, υποδεικνύεται ο ακριβής τύπος του παθογόνου και η ποσότητα του· μπορείτε επίσης να μάθετε την ακριβή περίοδο κατά την οποία εκδηλώθηκε η μόλυνση από την παρουσία ορισμένων ανοσοσφαιρινών.

Υπάρχουν διάφορες κατηγορίες ανοσοσφαιρινών που μπορούν να αντικατοπτρίζουν ξεκάθαρα την κατάσταση του ασθενούς:

1. Το IgG αναπτύσσεται στο αίμα εντός 4 εβδομάδων από τη μόλυνση και μπορεί να παραμείνει στο αίμα για αρκετά χρόνια. Δεν είναι πάντα δείκτες βακτηρίων· μερικές φορές χρησιμεύουν ως μνήμη του σώματος ότι κάποτε συνάντησε παρόμοιο τύπο παθογόνου.
2. IgM - εμφανίζονται στην αρχή μετά τη μόλυνση. Κατά κανόνα, είναι ορατά ήδη την 5η ημέρα· αυτοί είναι οι πρώτοι υπερασπιστές του σώματος που επιτίθενται στο βακτήριο. Εξαφανίζονται από το αποτέλεσμα του αίματος μετά από δύο εβδομάδες. Εάν υπάρχουν στην εξέταση αίματος, τότε μπορεί να υποτεθεί ότι η μόλυνση εμφανίστηκε αρκετά πρόσφατα, περίπου πριν από μια εβδομάδα.
3. Το IgA σηματοδοτεί την οξεία ανάπτυξη μιας βακτηριακής λοίμωξης στο σώμα ή το υποτροπιάζον στάδιο μιας χρόνιας νόσου.

Υπάρχουν πολλές περιπτώσεις που η ανάλυση δείχνει θετικό αποτέλεσμα, αλλά το άτομο δεν αισθάνεται καθόλου άσχημα. Αυτό δεν υποδηλώνει καθόλου διαγνωστικό σφάλμα· μάλλον, υπάρχει μια χρόνια μορφή της νόσου που είναι αδρανής ή η ανάπτυξη της νόσου μόλις αρχίζει. Αυτή τη στιγμή, δεν υπάρχουν αρκετά βακτήρια που μπορούν να προκαλέσουν συμπτώματα.

Τώρα γνωρίζετε την αρχή της ανάλυσης και μπορείτε να υποβάλετε αίτηση για αυτήν τη διάγνωση εάν υπάρχει η παραμικρή υποψία μολυσματικής νόσου. Η διάρκεια της περαιτέρω θεραπείας και η αποτελεσματικότητά της εξαρτώνται άμεσα από το πόσο γρήγορα υποβάλλεστε στη διάγνωση, η οποία είναι πρακτικά ανώδυνη. Για να διατηρείτε συνεχώς την υγεία σας καλό επίπεδο, συνιστάται η διενέργεια προληπτικής διάγνωσης PCR μία φορά το χρόνο για την παρουσία ΣΜΝ, καθώς και λοιμώξεων άλλων οργάνων. Είναι καλύτερο να προλάβετε μια ασθένεια παρά να αντιμετωπίσετε τις συνέπειές της αργότερα.