Acasă Sfat

Câte zile durează un test PCR pentru infecție? Analiza PCR. Cum să faci un frotiu pentru boli cu transmitere sexuală

20.12.2020

Reacția în lanț a polimerazei (PCR) este o metodă de înaltă precizie în domeniul diagnosticării patologiilor ereditare, infecțiilor, bolilor virale în orice stadiu (acut sau cronic), precum și - într-un stadiu incipient - înainte de manifestările evidente ale bolii prin identificarea agenți patogeni pe baza lor ADN, ARN, care sunt material genetic, în probele obținute de la pacient. Și astăzi vom vorbi despre esența, etapele de diagnosticare și principiile metodelor de reacție în lanț a polimerazei (PCR), precum și despre costul acesteia.

Ce este reacția în lanț a polimerazei

Baza analizei este amplificarea (dublarea) - crearea multor copii dintr-o secțiune scurtă de ADN (acid dezoxiribonucleic), care reprezintă complexul genetic uman. Studiul necesită o cantitate foarte mică de substanță fiziologică (sputa, fecale, răzuire epitelială, suc de prostată, sânge, spermatozoizi, lichid amniotic, mucus, țesut placentar, urină, salivă, lichid pleural, lichid cefalorahidian). În acest caz, de exemplu, chiar și un singur microbi dăunător poate fi detectat în tractul genito-urinar al pacientului.

Tehnica PCR (reacție în lanț a polimerazei) a fost dezvoltată de omul de știință american K. Mullis, care a primit Premiul Nobel în 1993.

Folosit activ:

  • în diagnosticul precoce al infecțiilor, genetice;
  • la examenul medico-legal atunci când există o cantitate extrem de mică de ADN disponibilă pentru examinare;
  • în medicină veterinară, farmaceutică, biologie, genetică moleculară;
  • pentru identificarea unei persoane prin ADN, confirmarea paternității;
  • în paleontologie, antropologie, ecologie (la monitorizarea calității produselor, factorilor de mediu).

Acest videoclip vă va spune în detaliu ce este o reacție în lanț a polimerazei:

Cui i se prescrie?

Reacția în lanț a polimerazei în diagnosticul bolilor infecțioase este una dintre cele mai fiabile metode de precizie și fiabilitate deosebite. De exemplu, fiabilitatea analizei PCR pentru chlamydia și mulți alți agenți patogeni este aproape de 100% (absolut). Cel mai adesea, procedura de reacție în lanț a polimerazei este prescrisă pacienților care au dificultăți în identificarea unui anumit agent patogen în timpul diagnosticului.

Se utilizează testul PCR de laborator:

  • pentru a detecta agenți patogeni care provoacă infecții ale organelor urinare și genitale greu de identificat prin culturi sau metode imunologice;
  • pentru rediagnosticarea HIV în stadiul inițial în cazul unui rezultat pozitiv, dar discutabil al testului inițial (de exemplu, la nou-născuți din părinți infectați cu SIDA);
  • să identifice cancerul într-un stadiu incipient (studiul mutațiilor oncogene) și să ajusteze individual regimul de tratament pentru un anumit pacient;
  • în scopul depistarii precoce și al potențialului tratament al patologiilor ereditare.

Astfel, viitorii părinți fac un test pentru a afla dacă sunt purtători ai unei patologii genetice; la copii, PCR determină probabilitatea expunerii la o boală transmisă prin moștenire.

  • pentru a detecta patologiile fetale din timp gestație (celulele individuale ale embrionului în creștere sunt examinate pentru posibile mutații);
  • la pacienții înainte de transplantul de organe - pentru „tiparea țesuturilor” (determinarea compatibilității tisulare);
  • pentru a identifica organismele patogene periculoase în sângele donatorului;
  • la nou-născuți - pentru a identifica infecțiile ascunse;
  • pentru a evalua rezultatele tratamentului antiviral și antimicrobian.

De ce să fii supus unei astfel de proceduri?

Deoarece PCR este o metodă de diagnosticare extrem de eficientă, dând rezultate de aproape 100%, procedura este utilizată:

  • pentru a confirma sau exclude diagnosticul final;
  • evaluarea rapidă a eficacității terapiei.

În multe cazuri, PCR este singurul test posibil pentru detectarea unei boli în curs de dezvoltare dacă alte metode de diagnostic bacteriologic, imunologic și virusologic sunt inutile.

  • Virușii sunt detectați folosind o procedură PCR imediat după infecție și înainte de apariția semnelor de boală. Detectarea precoce a virusului permite un tratament prompt.
  • Așa-numita „încărcare virală” (sau numărul de viruși din organism) este de asemenea determinată prin analiza ADN-ului folosind o metodă cantitativă.
  • Agenții patogeni specifici (de exemplu, bacilul tuberculozei Koch) sunt dificili și durează prea mult până la cultură. Testarea PCR permite detectarea rapidă a agenților patogeni minimi (vii și morți) în probe convenabile pentru testare.

Se utilizează analiza detaliată a ADN-ului patogen:

  • pentru a determina sensibilitatea acestuia la anumite tipuri de antibiotice, ceea ce permite tratamentul imediat;
  • să controleze răspândirea epidemilor în rândul animalelor domestice și sălbatice;
  • pentru a identifica și urmări noi tipuri diferite microbi și subtipuri de patogeni care au provocat epidemii anterioare.

Tipuri de diagnosticare

Metoda standard

Analiza reacției în lanț a polimerazei se efectuează pe baza amplificării multiple (dublării) unui fragment specific de ADN și ARN folosind enzime de primeri speciale. Ca rezultat al lanțului de copiere, se obține o cantitate suficientă de material pentru cercetare.

În timpul procedurii, doar fragmentul dorit (corespunzător condițiilor specifice specificate) este copiat și dacă este prezent efectiv în probă.

Acest videoclip detaliat cu diagrame utile explică cum funcționează PCR:

Alte metode

  • PCR în timp real. În acest tip de cercetare, procesul de identificare a unui anumit fragment de ADN începe după fiecare ciclu, și nu după finalizarea întregului lanț de 30 - 40 de cicluri. Acest tip de cercetare vă permite să obțineți informații despre cantitatea de agent patogen (virus sau microb) din organism, adică să efectuați o analiză cantitativă.
  • RT-PCR (mod transcripție inversă). Acest test este folosit pentru a căuta ARN monocatenar pentru a detecta virusurile a căror bază genetică este ARN (de exemplu, virusul hepatitei C, virusul imunodeficienței). În acest studiu, se folosește o enzimă specială - transcriptază inversă și un primer specific, iar ADN-ul monocatenar este construit pe baza ARN. Apoi a doua catenă de ADN este recuperată din această catenă și se efectuează procedura standard.

Indicații pentru testare

Procedura PCR este utilizată în clinica de boli infecțioase, neonatologie, obstetrică, pediatrie, urologie, ginecologie, venerologie, neurologie, nefrologie și oftalmologie.

Indicații pentru testare:

  • determinarea riscului de a dezvolta anomalii genetice la un copil cu probabilitatea de patologii ereditare;
  • diagnosticarea ambilor părinți atunci când planificați o sarcină sau starea gravă a mamei în timpul unei sarcini în curs;
  • dificultăți de concepție, identificarea cauzelor infertilității;
  • suspiciunea de infecții cu transmitere sexuală în stadiul acut și cu simptome ale trecerii lor la cronice;
  • detectarea cauzelor proceselor inflamatorii de origine necunoscută;
  • contacte sexuale ocazionale și regulate neprotejate;
  • determinarea sensibilității unui microorganism patogen la antibiotice specifice;
  • pacienții cu infecție latentă suspectată pentru a detecta agenți patogeni înainte de apariția simptomelor evidente (diagnostic preclinic);
  • pacienții să confirme recuperarea după boală (diagnostic retrospectiv);

Diagnosticarea este, de asemenea, utilizată dacă este necesar să se identifice cu exactitate următorii agenți patogeni::

  • virusuri hepatitice (A B C G), imunodeficiență umană, citomegalovirus;
  • Vibrio cholerae;
  • virus herpes simplex, specii herpetiforme;
  • retro - adeno - și rinovirusuri;
  • virusuri rubeolă, Epstein-Barr, varicelă (Zoster);
  • parvo și picornovirusuri;
  • bacteria Helicobacter pylori;
  • Legionella, tipuri patogene de Escherichia coli;
  • Staphylococcus aureus;
  • patogen;
  • clostridii, difterie și hemophilus influenzae;

De asemenea, este utilizat pentru a determina infecțiile:

  • Mononucleoza infectioasa;
  • borelioza, listerioza, encefalita transmisa de capuse;
  • candidoză cauzată de ciuperci Candida;
  • infecții cu transmitere sexuală – trichomoniază, ureaplasmoză, treponema pallidum, gardnereloză, gonoree, micoplasmoză, chlamydia;
  • tuberculoză.

Contraindicatii pt

Deoarece procedura nu se desfășoară cu pacientul, fără niciun impact asupra organismului, ci cu material biologic luat pentru cercetare, nu există contraindicații pentru PCR din cauza absenței unui potențial pericol.

Cu toate acestea, biomaterialul nu este colectat din canalul cervical al uterului după procedura de colposcopie. Trimiterea frotiurilor și răzuirii pentru analiză este permisă numai la 4-6 zile după încheierea menstruației și încetarea completă a secreției.

Este metoda sigură?

Nu este posibil nici un impact negativ asupra pacientului în timpul unui studiu izolat al biomaterialului său în laborator.

Pregătirea pentru procedură (depunerea substanțelor biologice pentru analiză)

Orice fluid biologic, țesut sau secreții corporale servesc ca probă pentru analiza PCR, care detectează ADN-ul unui agent patogen străin. Substanța de testat este luată sub formă de prelevare de sânge dintr-o venă, răzuire din laringe, cavitate nazală, uretră, cavitate pleurală, col uterin.

Înainte de procedura de diagnostic, medicul explică pacientului ce material va fi colectat:

  1. La examinarea infecțiilor cu transmitere sexuală, se colectează secreții din organele genitale, urină și un frotiu din uretra.
  2. Când se analizează infecțiile herpetice, se iau pentru analiză citomegalovirus, mononucleoză, urină și un tampon de gât; pentru hepatită, toxoplasmoză, se prelevează sânge dintr-o venă.
  3. În scopuri de diagnosticare tipuri variate Se colectează lichidul cefalorahidian.
  4. În pneumologie, probele pentru analiză sunt spută și lichid pleural.
  5. Atunci când se efectuează un studiu al posibilelor infecții intrauterine în timpul sarcinii, lichidul amniotic și celulele placentare sunt utilizate pentru analiză.

Fiabilitatea și acuratețea analizei depind de sterilitatea condițiilor la luarea materialului. Deoarece testarea PCR este foarte sensibilă, orice contaminare a substanței de testat poate distorsiona rezultatul.

Pregătirea competentă pentru livrarea de biomaterial nu prezintă dificultăți pentru pacienți. Există anumite recomandări:

  • când se analizează infecțiile cu transmitere sexuală:
    • excludeți contactele intime cu 72 de ore înainte de trimiterea materialului;
    • opriți utilizarea oricăror produse vaginale cu 3 zile înainte;
    • din seara zilei precedente nu efectuați igiena zonei examinate;
    • excludeți urinarea cu 3-4 ore înainte de a preleva o probă din uretră;
  • încetați să luați antibiotice cu o lună înainte de testarea pentru infecții;
  • sângele este donat dimineața înainte de a mânca și a bea;
  • Prima probă de urină de dimineață este colectată într-un recipient steril după o toaletă intimă amănunțită.

Citiți mai jos despre modul în care se efectuează diagnosticarea folosind metoda reacției în lanț a polimerazei.

Cum funcționează procedura?

Atunci când se efectuează un studiu PCR, anumite cicluri sunt repetate iar și iar într-un reactor (amplificator sau termociclor):

  1. Primul pas este denaturarea. Saliva, sângele, materialul de biopsie, probele ginecologice, sputa, în care se suspectează prezența ADN-ului (sau ARN-ului) unui agent patogen, este plasată într-un amplificator, unde materialul este încălzit și ADN-ul este împărțit în două lanțuri separate.
  2. Al doilea pas este recoacerea sau răcirea ușoară a materialuluiși adăugarea de primeri la acesta care pot recunoaște regiunile dorite din molecula de ADN și se pot lega de ele.
  3. Al treilea pas este alungirea– apare după ce 2 primeri sunt atașați la fiecare dintre catenele de ADN. În timpul procesului, fragmentul de ADN al agentului patogen este completat și se formează copia acestuia.

Aceste cicluri sunt repetate ca o „reacție în lanț”, de fiecare dată ducând la dublarea copiilor unui anumit fragment de ADN (de exemplu, segmentul în care este programat un anumit virus). În câteva ore, se formează multe copii ale fragmentului de ADN, iar prezența lor în probă este detectată. După aceasta, rezultatele sunt analizate și comparate cu datele dintr-o bază de date cu diferite tipuri de agenți patogeni pentru a determina tipul de infecție.

Citiți mai jos despre decodificarea rezultatelor și concluzia bazată pe reacția PCR.

Decodificarea rezultatelor

Rezultatul final al studiului se emite la 1 – 2 zile de la depunerea materialului biologic. Adesea - deja în prima zi după analiză.

Analiza calitativa

  • Negativ rezultatul înseamnă că nu au fost găsite urme de agenți infecțioși în substanța prezentată pentru testare.
  • Pozitiv rezultatul înseamnă detectarea virusurilor sau bacteriilor patogene într-o probă biologică cu un grad foarte mare de acuratețe la momentul depunerii materialului.

Dacă rezultatul este pozitiv, dar nu sunt detectate semne de creștere a infecției, această stare a corpului se numește „transport sănătos” asimptomatică. Cel mai adesea observat la luarea biomaterialului dintr-un anumit loc (canal cervical, uretra, cavitatea bucală) în boli virale. În acest caz, tratamentul nu este necesar, dar este necesară supraveghere medicală constantă, deoarece există posibilitatea de:

  • răspândirea virusului de la purtători și infectarea persoanelor sănătoase;
  • activarea procesului și trecerea bolii la o formă cronică.

Totuși, dacă testul de sânge este pozitiv, acest lucru indică faptul că infecția a lovit corpul, iar aceasta nu mai este o stare de purtător, ci o patologie care necesită o terapie specifică imediată.

Analiza cantitativa

Rezultatul cantitativ este determinat de un specialist special pentru un anumit tip de infecție. Pe baza acestuia, este posibil să se evalueze gradul de dezvoltare și stadiul bolii, ceea ce face posibilă prescrierea promptă a tratamentului corect.

cost mediu

Prețurile pentru reacția în lanț a polimerazei sunt determinate de: tipul cercetării, dificultatea identificării agentului patogen, dificultatea colectării materialului biologic, tipul analizei (calitative sau cantitative) și nivelul prețului în laborator.

Pe de altă parte, atunci când se studiază PCR, este posibil să se identifice mai mulți agenți patogeni simultan atunci când se colectează un tip de material pentru analiză. Acest lucru vă permite să economisiți la alte teste de laborator.

Costul aproximativ al analizei PCR în ruble:

  • gonococ, gardnerella, trichomonas vaginalis – de la 180
  • Chlamydia trachomatis – din 190
  • papilomavirus - de la 380 la 500
  • biocenoza tractului urogenital la femei (evaluarea cantitativă și calitativă a microflorei) – de la 800.

Și mai multe informații utile cu privire la testarea PCR sunt conținute în videoclipul de mai jos:

Esența metodei de diagnostic PCR

Metoda reacției în lanț a polimerazei (PCR) se bazează pe principiile biologiei moleculare și aparține domeniului cercetării genetice.

Orice organism viu conține în structura sa molecule de acizi nucleici - ADN și ARN. Acesta este un fel de pașaport genetic care ajută la determinarea cărei specii îi aparține unul sau altul dintre „purtătorii” săi. Cu toate acestea, pentru a scana acest „pașaport”, până de curând era necesar un anumit volum minim de material biologic. Dacă concentrația de ADN a fost sub nivelul necesar, analiza diagnostică nu a fost posibilă.

La diagnosticare Metoda PCR o probă de material biologic este tratată cu enzime speciale (polimeraze), care fac posibilă începerea procesului de copii multiple ale ADN-ului (ARN) existent. Folosind o cascadă de reacție în lanț, conform principiului progresiei geometrice, în doar câteva ore este posibil să se obțină câteva zeci de trilioane de copii dintr-o moleculă de acid nucleic. Acest volum este mai mult decât suficient pentru a efectua orice studii comparative.

Pentru analiză, se folosește un termociclator, în care, în condiții stricte de temperatură, are loc procesul de replicare multiplă a ADN-ului. De obicei, 20-30 de cicluri de replicare sunt suficiente. Fiecare dintre ele include 3 etape consecutive:

  • denaturare - încălzirea matricei ADN la 96°C cu distrugerea legăturilor de hidrogen dintre lanțurile adiacente;
  • recoacere - scăderea temperaturii cu 4°C pentru a crea o furcă de replicare;
  • alungirea - lansarea de ADN polimeraze pentru a sintetiza noi lanțuri de nucleotide pe baza celui mamă.

Fiecare ciclu în trei etape durează în medie 15-20 de minute.

Avantajele diagnosticului PCR

Analiza PCR este de înaltă tehnologie și necesită profesionalism din partea personalului de laborator, dar pentru medicina modernă a devenit o sursă de oportunități fără precedent în domeniul diagnosticului precis.

Avantajele PCR:

  • versatilitate (orice material biologic poate fi examinat - de la celule sanguine, saliva și păr până la puncte suspecte de la locul crimei);
  • prag de sensibilitate ridicat (metoda este capabilă să dea rezultate în prezența celulelor individuale sau a moleculelor individuale de ADN în probă);
  • multitasking - într-o singură abordare puteți identifica mai multe tipuri diferite de purtători de informații simultan (metodele bacteriologice nu sunt capabile de acest lucru, deoarece necesită medii nutritive diferite pentru fiecare tip de microorganism);
  • capacitatea de a efectua analize cantitative precise;
  • viteza de procesare (spre deosebire de alte tipuri de cercetare genetică, diagnosticarea PCR durează doar 5-7 ore);
  • acuratețea rezultatului (dacă tehnologia este urmată, eroarea este practic eliminată);
  • cost relativ scăzut (analiza PCR nu depășește prețul mediu al testelor standard).

Toate aceste avantaje fac posibilă utilizarea reacției în lanț a polimerazei pentru monitorizarea regulată a procesului de tratament.

Nu degeaba dezvoltatorul metodei de diagnosticare PCR a primit Premiul Nobel pentru „crearea sa”. Metoda reacției în lanț a polimerazei permite:

  • determinați tulpina agentului infecțios cu un conținut minim în biomaterial (până la structuri virale individuale);
  • calculați concentrația exactă a agentului patogen în întregul organism (pentru a determina doza optimă de medicamente);
  • evaluează gradul de impact patologic asupra pacientului și identifică tulpini cu rezistență farmacologică ridicată;
  • stabilirea etapelor succesive ale infecţiei şi realizarea unui prognostic suplimentar.

Acest lucru este interesant! Capacitățile analizei PCR sunt mult mai largi decât evaluarea cantitativă și calitativă a fondului infecțios din corpul uman. Pe lângă identificarea infecțiilor, este folosit pentru a stabili rudenia, determinarea identității, identificarea patologiilor genetice și compararea biomaterialelor în criminalistică.

Ce infecții pot detecta diagnosticul PCR?

Analiza PCR este capabilă să identifice cu exactitate orice purtător infecțios inclus în catalogul medical modern de boli:

  • agenți patogeni de hepatită de toate tipurile (PCR vă permite să identificați sursa de infecție în stadiul perioadei de incubație și să începeți tratamentul cu mult înainte de apariția simptomelor bolii);
  • agenți patogeni ai HIV și BTS (ureaplasmă, micoplasmă, chlamydia, trichomonas);
  • grup de infecții TORCH (relevante la examinarea femeilor însărcinate pentru depistarea precoce a patologiilor fetale);
  • tuberculoza (forma latentă a bolii);
  • candidoză (forma latentă);
  • infecție cu enterovirus;
  • mononucleoza;
  • listerioza;
  • salmoneloză (determinarea unei tulpini specifice);
  • papilomavirus;
  • gardnereloză;
  • virus encefalită transmisă de căpușe.


Deosebit de populară este analiza infecțiilor intracelulare (de exemplu, chlamydia), a căror determinare în mod obișnuit este dificilă chiar și cu o concentrație mare a acestor microorganisme în țesuturile pacientului.

Având în vedere natura multitasking a metodei, este posibil să se efectueze o analiză PCR simultană pentru 12 infecții subiacente. O abordare integrată este o alegere convenabilă pentru screening-ul de rutină al organismului pentru infecții cu transmitere sexuală, cu risc minim de diagnosticare greșită.

Pe o notă! Cu ajutorul diagnosticului PCR, se face o prognoză pentru așa-numitele forme „latente” de infecții care se află în organism fără a manifesta simptome ale bolii (mai ales important în tratamentul bolilor ginecologice și urologice, tuberculozei, transmise de căpușe). encefalită, papilomavirus).

Ce materiale biologice sunt studiate?

Nu există norme sau limite stabilite. Versatilitatea metodei vă permite să utilizați orice material biologic pentru analiză:

  • frotiu vaginal, răzuire din uretra și canalul cervical (pentru a diagnostica BTS);
  • urină (tuberculoză, unele BTS, citomegalovirus);
  • sânge (HIV, hepatită, infecții TORCH);
  • tampon de gât (mononucleoză, citomegalovirus);
  • lichidul cefalorahidian (neuroinfectii)
  • lichidul amniotic și țesutul placentar (analiza infecțiilor cu TORCH pentru prevenirea patologiilor dezvoltării fetale);
  • lichid pleural (infectii pulmonare).

Pentru alte tipuri de diagnosticare PCR (stabilirea relațiilor, compararea biomaterialelor), se utilizează saliva, părul, unghiile, celulele epiteliale și alte surse de informații genetice.

Pe o notă! Folosind metoda de diagnosticare PCR, agenții patogeni sunt detectați nu numai în țesuturile vii, ci și în probele de sol, apă și substraturi vegetale; să evalueze activitatea patogenă a microorganismelor atât în ​​organismul uman, cât și în mediul său (prezența unei surse identificate a bolii va permite luarea măsurilor adecvate pentru prevenirea acesteia în viitor).

Cum să vă pregătiți pentru test

Pacienții clinicii noastre nu trebuie să se întrebe unde să fie testați pentru PCR. Asiguram toate conditiile pentru colectarea sterila a materialului si trimiterea acestuia la laborator.

Nu este necesară o pregătire specială, dar lista recomandari generale este indicat să se conformeze. Pentru câteva zile, renunțați la alcool, limitați fumatul, dacă este posibil, eliminați medicamentele, încercați să evitați situațiile stresante și activitatea fizică grea.

În caz contrar, pregătirea pentru analiză depinde de tipul de biomaterial:

  • înainte de a face un frotiu sau răzuire pentru infecții urogenitale, se abține de la actul sexual timp de 2-3 zile (femeile ar trebui să se asigure că ziua testului nu se încadrează în timpul menstruației);
  • înainte de a face un test de sânge pentru PCR, abțineți-vă de la mâncare dimineața (testul se face pe stomacul gol) și beți un pahar cu apă plată curată;
  • Înainte de a dona urină, abține-te de la a consuma alimente care afectează aciditatea urinei (fructe, carne, leguminoase, verdeață).

Important! Cea mai importantă cerință în diagnosticarea PCR a infecțiilor este puritatea biomaterialului. Prin urmare, încercați să faceți toate eforturile pentru a preveni contaminarea țesuturilor cu ADN străin (aveți grijă de sterilitatea containerului de transport, de igiena personală și de disponibilitatea hainelor curate).

Explicația analizei PCR

Rezultatele unei analize PCR calitative pentru infecții sunt prezentate sub forma unui tabel, unde în fața fiecărui agent infecțios există un semn corespunzător:

  • rezultat negativ (nu există niciun agent patogen de acest tip);
  • rezultat pozitiv (patogen detectat).

Absența simptomelor bolii poate să nu corespundă cu imaginea reală, astfel încât rezultatele testelor vor fi neașteptate pentru unii. Nu trebuie să fii supărat: identificarea agentului infecțios în stadiile incipiente este cheia unei remedii de succes și rapidă.

Când efectuați o analiză PCR cantitativă, puteți estima gradul de încărcare virală (aflați numărul de copii ale virusului pe unitate de volum). Datorită acestui tip de studiu, este posibil să se determine intensitatea procesului infecțios, precum și să se evalueze eficacitatea tratamentului.

Analiza PCR: preț și calendar

Timpul mediu de diagnosticare este de 5-10 ore. Rezultatele sub formă de tabel sunt emise chiar în următoarea zi lucrătoare după colectarea biomaterialului.

Atunci când alegeți o analiză PCR, prețul nu este o problemă cardinală. În medie, costul nu depășește testele biochimice convenționale și, spre deosebire de cea mai mare parte a studiilor genetice, este disponibil pentru toți pacienții.

Reacția în lanț a polimerazei (PCR) este o metodă de înaltă precizie de diagnostic genetic molecular care vă permite să identificați diferite boli infecțioase și ereditare la om, atât în ​​stadiul acut, cât și în cel cronic, și cu mult înainte ca boala să se manifeste.

Reacția în lanț a polimerazei (PCR) a fost dezvoltată de Kary Mullis (SUA) în 1983, pentru care a fost distins cu Premiul Nobel pentru Chimie în 1993.

Analiza PCR a devenit un fel de „standard de aur” pentru majoritatea infecțiilor. Majoritatea specialiștilor îl întâlnesc aproape în fiecare zi și nu-și pot imagina să facă un diagnostic final fără el. PCR devine adesea singura reacție de identificare a stadiilor active ale bolii în momente în care alte metode de diagnostic bacteriologic, virusologic și imunologic nu funcționează.

Avantajele diagnosticului PCR în medicina modernă:

Detectarea directă a prezenței unui agent patogen (și anume, o regiune specifică de ADN sau ARN a agentului patogen) în proba de testat.
Specificitatea ridicată vă permite să determinați o secțiune unică de ADN sau ARN caracteristică unui anumit agent patogen, ceea ce elimină posibilitatea unor reacții false.
Sensibilitatea ridicată a metodei PCR vă permite să detectați chiar și celule individuale ale agenților patogeni (viruși, bacterii). Sensibilitatea analizei PCR este de 10-1000 de celule în proba de testat (de exemplu, sensibilitatea testelor imunologice și microscopice este de numai 103-105 celule).
Dezvoltarea unei tehnici PCR universale pentru detectarea diferiților agenți patogeni. Obiectul cercetării prin metoda PCR este materialul genetic (ADN, ARN) al agentului patogen. Tehnica vă permite să identificați mai mulți agenți patogeni dintr-o probă biologică.
Primiți rezultatele analizei destul de repede. O examinare completă se efectuează în 4-4,5 ore, mai rar - puțin mai mult.
Posibilitatea detectării agenților patogeni înainte de apariția simptomelor bolii (diagnostic preclinic) și după boală trecută(diagnostic retrospectiv). Un exemplu de diagnostic preclinic ar fi examinarea în timpul perioadei de incubație (din momentul infecției până la apariția plângerilor pacientului), precum și infecția latentă (când nu există deloc simptome, ci doar date de laborator - PCR, de exemplu). Unul dintre aspectele importante ale diagnosticului PCR este efectuarea PCR în material de arhivă sau rămășițe biologice, ceea ce este important pentru identificarea personalității sau a paternității.

În prezent, diagnosticul PCR este în curs de dezvoltare semnificativă. Metoda în sine este îmbunătățită, noi soiuri de PCR apar din nou și din nou, iar noi sisteme de testare pentru această reacție intră pe piața medicală. Datorită acestui fapt, costul studiilor PCR devine din ce în ce mai accesibil pentru o gamă largă de pacienți în fiecare an.

Pe ce se bazează metoda PCR?

Baza reacției în lanț a polimerazei este dublarea (amplificarea) repetată a unei anumite secțiuni de ADN sau ARN folosind enzime în laborator. Ca rezultat, se formează cantitatea de ADN sau ARN suficientă pentru analiza vizuală. În timpul studiului, este copiată numai zona care se potrivește condițiilor specificate și numai dacă este prezentă în proba de testare.

De exemplu, materialul pentru cercetare în care se presupune că este prezent prezența fragmentelor de ADN sau ARN ale unui agent patogen (salivă, sânge, urină, scurgeri din organele genitale) este plasat într-un reactor special (amplificator). În continuare, i se adaugă enzime specifice, care se leagă de ADN-ul sau ARN-ul agentului patogen, iar copia acestuia este sintetizată. Această copiere are loc în mai multe etape, cum ar fi o „reacție în lanț”, și în cele din urmă se pot forma sute și mii de copii dintr-o singură copie a materialului genetic. Urmează apoi analiza și compararea rezultatului cu baza de date existentă privind structura diferiților agenți patogeni. Folosind PCR, puteți nu numai să identificați tipul de agent patogen, ci și să oferiți un rezultat cantitativ al analizei, adică câți agenți patogeni sunt în corpul uman.

Metoda PCR extinde în prezent gama de posibilități de cercetare: introducerea de mutații, splicing fragmente de ADN și s-a răspândit în medicină, de exemplu, pentru stabilirea paternității, apariția de noi gene etc.

Ce infecții pot fi detectate folosind diagnosticul PCR?

1) Infecția cu HIV (virusul imunodeficienței umane HIV-1 poate fi detectat)
2) Hepatită virală A, B, C, G (ARN-HAV, ADN-HBV, ARN-HCV, ARN-HGV)
3) Mononucleoza infecțioasă (ADN virusului Epstein-Barr - EBV)
4) Infecția cu citomegalovirus (ADN-CMV)
5) Infecție cu herpes (virusul ADN herpes simplex HSV tipurile 1 și 2)
6) ITS (infectii cu transmitere sexuala) – ureaplasmoza, gardnereloza, chlamydia, micoplasmoza, trichomonaza,
7) Tuberculoza (Mycobacterium tuberculosis)
8) Virusuri oncogene - infecție cu papilomavirus (papillomavirus uman (inclusiv tipurile sale oncogene 16, 18, 31, 33, 45, 51, 52, 56, 58 și 59)
9) Borrelioza, encefalita transmisa de capuse
10) Listerioza
11) Candidoză (ciuperci din genul Candida)
12) Infecția cu Helicobacter pylori
si altii

Având în vedere gama de agenți patogeni, diagnosticul PCR este utilizat în mod activ în practica ginecologică, urologică, practica bolilor infecțioase, pneumologie, ftiziologie, gastroenterologie, hematologie, oncologie și altele.

Material pentru cercetare și reguli de colectare

Materialul pentru cercetarea PCR, în care poate fi detectat ADN bacterian străin sau ADN sau ARN viral, poate fi diverse medii biologice și fluide umane: mucus, urină, sânge, spută, răzuire de celule epiteliale, țesut placentar, sânge, suc de prostată, lichid amniotic, lichid pleural.

La depistarea infecțiilor cu transmitere sexuală (ITS), bărbații și femeile sunt testați pentru secreții genitale, frotiu sau răzuire din colul uterin, frotiu sau răzuire din uretră (uretra) și urină.

La examinarea pentru infecții (infecții herpetice, CMV, mononucleoză, toxoplasmoză, hepatită B, C, infecție cu HIV), se prelevează sânge pentru PCR.

Pentru a diagnostica mononucleoza infecțioasă, CMV sau infecția herpetică, se ia un tampon din gât și se prelevează urină pentru a testa CMV. Adesea pentru a examina pentru o leziune sistem nervosÎntr-o serie de studii, lichidul cefalorahidian este luat.

În pneumologie, materialul folosit este sputa și lichidul pleural.

La examinarea infecțiilor intrauterine - lichid amniotic, țesut placentar.

Pregătirea pentru livrarea materialului și diagnosticul PCR

Aproape toți pacienții care sunt supuși diagnosticului PCR au dreptul de a conta pe un rezultat fiabil, precis și rapid, care depinde în mare măsură de capacitățile laboratorului și de profesionalismul medicului de laborator. În același timp, mulți nu cred că această fiabilitate depinde în mare măsură de noi înșine, și anume de recomandările medicului curant, de stilul de viață și de corectitudinea colectării materialelor. La colectarea materialului, sunt necesare condiții care să excludă contaminarea (contaminarea) materialului și, în consecință, să pună la îndoială obiectivitatea analizei.

Pregătirea corectă pentru trimiterea materialului nu este deosebit de dificilă. Există următoarele recomandări de la medici pentru pacienți:

1) să nu fie activ sexual cu o zi înainte de a trimite materialul;
2) sângele pentru testare este donat dimineața pe stomacul gol (nu mâncați și nu beți);
3) la donarea de urină, prima porție de dimineață este colectată într-un recipient curat, steril.

Timp de pregătire pentru analiza PCR

Rezultatul final este gata la 1,5-2 zile de la depunerea materialului. În unele cazuri, rezultatul este gata în prima zi.

Interpretarea rezultatelor PCR

Negativ rezultatul PCR indică faptul că nu au fost găsite urme de agenți infecțioși în materialul de testat la momentul livrării. Cele mai multe cazuri arată absența infecției care s-a încercat să fie găsită în proba de testat.

Pozitiv rezultatul PCR indică detectarea urmelor de infecție în proba biologică testată. Cu mare acuratețe, un rezultat pozitiv indică prezența infecției în acest moment timp.

Există situații în care PCR se dovedește a fi pozitiv, dar nu se poate vorbi de o infecție activă - acesta este așa-numitul „purtător sănătos” fără simptome clinice ale bolii, care nu necesită tratament, dar necesită monitorizare dinamică de către un medic. . Se observă mai des cu o serie de infecții virale (HPV, infecție CMV, infecție EBV, infecție herpetică și altele) în materiale precum saliva, răzuire ale canalului cervical, uretra, adică dintr-un focar local. Cu toate acestea, nu trebuie să uităm că transmiterea infecției de la purtători la persoanele sănătoase este posibilă, la fel ca și trecerea la o formă cronică a bolii cu activarea procesului. Dacă PCR este pozitivă în sânge, atunci acesta nu mai este un transport și necesită un tratament specific.

Rezultatul cantitativ al PCR este evaluat numai de către un medic individual pentru o anumită infecție separat și nu are gradări generale. Pe baza rezultatului PCR cantitativ, medicul poate determina gradul de activitate a infecției și poate stabili stadiul bolii, care va afecta cu siguranță cursul și dozele de medicamente prescrise.

Una dintre ultimele întrebări interesante: cât de precisă este diagnosticul PCR?

Există 3 definiții pentru analiza PCR:

1. Acuratețe (cu un grad ridicat de probabilitate este posibilă detectarea sau evitarea infecției).
2. Specificitatea (acuratețea detectării unei anumite infecții).
3. Sensibilitate (chiar și cu un conținut scăzut de material genetic al agenților patogeni din proba de testat, infecția va fi detectată).

Reacția în lanț a polimerazei practic nu produce rezultate fals pozitive (adică nu există probe pozitive în care nu există infecție). Rezultatele fals-negative sunt rare (cel mai adesea din cauza absenței unei infecții active la persoană în acest moment). De exemplu, infecție latentă, infecție cronică fără activitate.

Medicul boli infecțioase N.I. Bykova

Videoclip despre de ce și cum să faceți un test PCR pentru infecții

Analiza PCR, nu mulți oameni știu ce este, deși astăzi este una dintre metodele inovatoare de diagnosticare a bolilor infecțioase, pentru care dezvoltatorul său a primit Premiul Nobel în 1993. Această metodă de înaltă tehnologie vă permite să detectați boală gravăîn stadiul inițial și începe tratamentul în timp util.

Analiza se bazează pe principiile biologiei moleculare. Cercetarea PCR presupune utilizarea unei enzime speciale care, sub influența conditii de temperatura, copiază ARN-ul și ADN-ul bacteriilor și virușilor prezenți în biomaterialul colectat. O astfel de reproducere în masă permite medicului să determine exact ce specie aparține bacteria care a provocat boala, precum și să măsoare nivelul concentrației sale în biomaterial. Procedura de copiere este efectuată într-un aparat special - un termociclor, care încălzește și răcește eprubetele cu materialul colectat, creând condiții convenabile pentru replicare.

Testarea PCR este efectuată din mai multe motive, dar cel mai adesea este utilizat pentru a determina prezența bolilor infecțioase, cum ar fi:

  • herpes;
  • infectii cu transmitere sexuala - chlamydia, ureaplasmoza, gardnereloza, trichomoniaza;
  • candidoză;
  • hepatită;
  • mononucleoza;
  • listerioza;
  • citomegalovirus;
  • tuberculoză;
  • papilomavirus uman;
  • encefalită transmisă de căpușe.

Analiza PCR nu se limitează la aplicarea sa în medicină; screening-ul se face adesea dacă este necesar să se înțeleagă cine deține materialul biologic găsit la locul crimei, adică analiza PCR este utilizată pe scară largă în știința criminalistică. Trebuie remarcat faptul că se prelevează un frotiu sau sânge pentru PCR dacă trebuie stabilită paternitatea. Rezultatele diagnosticului PCR nu sunt în niciun caz inferioare analizei obișnuite de rudenie ADN și sunt mult mai ieftine.

Caracteristici de diagnosticare

Analiza PCR are un număr mare de aspecte pozitive. În primul rând, este important să rețineți sensibilitatea testului. Analizorul PCR este capabil să detecteze moleculele de ADN bacteriene chiar și în cantități mici, adică medicul primește informații despre stadiu timpuriu boala sau debutul unei forme cronice a bolii. Un test de sânge PCR poate determina chiar prezența unei boli infecțioase, care se află într-o formă latentă și nu se arată în niciun fel.

Trebuie remarcat faptul că analiza PCR la bărbați și femei poate fi efectuată în prezența oricărui tip de material, nu trebuie să fie sânge sau frotiu, saliva, celulele pielii și chiar urina.

Rezultatele testelor PCR pot fi extinse, deoarece diagnosticarea PCR a infecțiilor poate captura imediat mai mulți agenți patogeni care se găsesc într-o probă de biomaterial. Examinarea poate fi finalizată în orice moment convenabil, ceea ce arată că o persoană îl poate afla într-o perioadă scurtă de timp, deoarece rezultatele diagnosticului biomaterialului sunt gata în 5 ore.

Toți medicii sunt de acord că un test de sânge pentru PCR sau alt material nu dă niciodată rezultate false dacă metodologia de diagnosticare este urmată corect. PCR pozitiv sau PCR negativ poate fi fals doar dacă personalul de laborator nu are un nivel ridicat de profesionalism. Dacă biomaterialul confiscat a fost contaminat sau a fost depozitat incorect, atunci interpretarea analizei PCR poate avea rezultate distorsionate.

Pregătirea pentru diagnosticare

Un frotiu PCR este prelevat din colul uterin al femeilor dacă este necesar pentru a determina boli cu transmitere sexuală, de exemplu, chlamydia, ureaplasma sau herpesul. Dacă este necesară testarea PCR pentru aceste bacterii la un bărbat, atunci i se ia o scurgere din uretră - suc de prostată, cu alte cuvinte. Sângele este testat folosind metoda PCR dacă doresc să determine hepatita, toxoplasmoza și HIV. Se efectuează un test PCR pentru mononucleoză și citomegalovirus prin îndepărtarea unui tampon din gât. Reacția în lanț a polimerazei pentru prezența infecțiilor pulmonare este efectuată cu prezența unui biomaterial, cum ar fi spută sau lichid pleural.

PCR se face în timpul sarcinii dacă există suspiciunea de infecții intrauterine, precum și boli și patologii ale sistemului nervos fetal. Țesutul placentar este prelevat de la femeia însărcinată ca biomaterial pentru cercetare. Dacă o persoană are leziuni ale sistemului nervos, lichidul cefalorahidian este examinat. Pentru a identifica bacterii precum Helicobacter pylori, se folosesc biopsii ale stomacului și duodenului.

Testarea PCR a urinei este, de asemenea, adesea folosită, dar este mai puțin preferabilă decât un test de sânge. Vă permite să vedeți prezența microorganismelor patogene care provoacă boli infecțioase, dar nu poate indica numărul exact al acestora și gradul de dezvoltare a bolii. Urina PCR este utilizată dacă din anumite motive nu este posibilă îndepărtarea sângelui sau frotiul. De asemenea, trebuie remarcat faptul că PCR în urină poate fi utilizată pentru a studia infecțiile la copiii mici. Un test de urină poate determina, de asemenea, prezența infecției și inflamației în vezica urinara, identificați pietrele, nisipul, precum și cistita și uretrita.

După cum am menționat mai sus, puteți face un test PCR dacă aveți vreun biomaterial. Analiza PCR, știi ce este, trebuie să știi și cum să te pregătești pentru diagnostic. Pregătirea depinde direct de ceea ce urmează să fie îndepărtat; de exemplu, trebuie să donați urină după o igiena atentă a organelor genitale dimineața. Sângele este donat pe stomacul gol; în timpul donării, sau mai bine zis, cu o zi înainte, trebuie să încetați să luați medicamente. Dacă există boli cronice, atunci lista de medicamente aprobate pentru utilizare este decisă individual de medicul curant.

Analiza scaunului se efectuează dimineața după o pregătire atentă. În ajunul testului, este necesar să se evite alimentele grele și să se efectueze o igienă temeinică a organelor genitale. Analiza scaunului va fi nesigură dacă biomaterialul a fost îndepărtat folosind o clismă; este necesară coborârea naturală a materialului. Nu este necesară nicio pregătire pentru a dona salivă; este suficient să renunți la fumat sau să bei suc de citrice.

Înainte de a transmite biomaterialul pentru a determina bolile care se transmit prin sex, pacienții sunt obligați să excludă contactul sexual cu două zile înainte de diagnosticarea PCR. Femeilor le este interzis să facă un frotiu de col uterin în timpul menstruației la două zile după menstruație, altfel interpretarea PCR va avea informații distorsionate.

Rezultatele screening-ului

Doar un medic calificat poate explica în detaliu ce spune o analiză PCR despre starea unui anumit pacient; nu va fi ușor să înțelegeți în mod independent datele indicate în formular. Dacă îi ceri medicului să descifreze datele, acesta va spune în primul rând dacă rezultatul este pozitiv sau negativ. Dacă analiza este negativă, înseamnă că persoana este sănătoasă și nu au fost găsite bacterii în materialul de testat. În cazul unui rezultat pozitiv, este indicat tipul exact de agent patogen și cantitatea acestuia; puteți afla și perioada exactă în care a apărut infecția prin prezența anumitor imunoglobuline.

Există mai multe clase de imunoglobuline care pot reflecta clar starea pacientului:

  1. IgG se dezvoltă în sânge în decurs de 4 săptămâni de la infecție și poate rămâne în sânge până la câțiva ani. Nu sunt întotdeauna indicatori ai bacteriilor; uneori servesc drept amintire a corpului că a întâlnit odată un tip similar de agent patogen.
  2. IgM - apar la început după infectare. De regulă, ele sunt vizibile deja în a 5-a zi; aceștia sunt primii apărători ai organismului care atacă bacteria. Ele dispar din rezultatul de sânge după două săptămâni. Dacă sunt prezenți în testul de sânge, atunci se poate presupune că infecția a apărut destul de recent, cu aproximativ o săptămână în urmă.
  3. IgA semnalează dezvoltarea acută a unei infecții bacteriene în organism sau stadiul recurent al unei boli cronice.

Există o serie de cazuri când analiza arată un rezultat pozitiv, dar persoana nu se simte deloc rău. Acest lucru nu indică deloc o eroare de diagnostic; mai degrabă, există o formă cronică a bolii care este latentă sau dezvoltarea bolii abia începe. În acest moment, nu există suficiente bacterii care pot provoca simptome.

Acum cunoașteți principiul analizei și puteți aplica pentru acest diagnostic dacă există cea mai mică suspiciune de boală infecțioasă. Durata tratamentului suplimentar și eficacitatea acestuia depind direct de cât de repede treceți la diagnostic, care este practic nedureros. Pentru a-ți menține sănătatea în mod constant nivel bun, se recomandă efectuarea diagnosticelor PCR preventive o dată pe an pentru prezența BTS, precum și a infecțiilor altor organe. Este mai bine să preveniți o boală decât să tratați consecințele ei mai târziu.